苦参碱对甲状腺相关性眼病眼眶成纤维细胞增殖的影响

目的观察苦参碱对甲状腺相关性眼病(TAO)眼眶成纤维细胞增殖的影响。方法⑴原代培养TAO患者及正常眼眶成纤维细胞,行细胞免疫荧光检测,确定所培养细胞为眼眶成纤维细胞。⑵将不同浓度梯度的苦参碱(10mg/L、20mg/L、40mg/L、80mg/L、160mg/L、320mg/L)及地塞米松溶液(0.01mg/L、0.1mg/L、1mg/L、10mg/L、100mg/L)分别作用于TAO患者及正常眼眶成纤维细胞,并行CCK8检测了解细胞活力。⑶根据CCK8检测情况选取了浓度为:160mg/L、320mg/L、480mg/L的苦参碱作用于TAO患者及正常眼眶成纤维细胞,并行ELISA检测TGF-β表达情况。⑷TUNEL试验检测经160mg/L、320mg/L、480mg/L的苦参碱作用后的TAO患者及正常眼眶成纤维细胞的凋亡情况。结果⑴细胞免疫荧光鉴定了原代分离培养的TAO患者和正常眼眶成纤维细胞的四种特征蛋白,其中Cytokeratin-18、Desmin、S-100三种蛋白均少量表达,Vimentin则大量表达,证明细胞为中胚层来源,鉴定细胞为成纤维细胞。⑵320mg/L的苦参碱对正常眼眶成纤维细胞活力的影响无统计学意义,100mg/L的地塞米松会抑制正常眼眶成纤维细胞活力;320mg/L的苦参碱能抑制TAO患者的眼眶成纤维细胞活力,但其抑制作用要弱于10mg/L及100mg/L的地塞米松。⑶在TAO患者眼眶成纤维细胞中TGF-β的含量高于正常眼眶成纤维细胞,但差异无统计学意义(P=0.49)。经不同浓度苦参碱处理的正常眼眶成纤维细胞及TAO患者眼眶成纤维细胞中的TGF-β的表达均稍有下降,并有浓度依赖,但这种表达差异同样无统计学意义。⑷苦参碱对正常眼眶成纤维细胞凋亡作用并不明显;经苦参碱处理后的TAO患者眼眶成纤维细胞凋亡增加,且苦参碱浓度越高、细胞凋亡率越大。结论本次研究观察到:苦参碱能降低TAO患者眼眶成纤维细胞活力并促进其凋亡,对正常眼眶成纤维细胞却无明显影响。苦参碱作用的具体机制还有待于进一步研究,期待为TAO的治疗提供新的思路。