长链非编码RNA UCA1对CCND2的调控作用和对胃癌细胞增殖能力的研究

Studies on the targeting of UCA1 with long non-coding RNA to regulate the regulation of miR-204 on CCND2 and the proliferation of gastric cancer

目的明确长链非编码RNA UCA1通过miR-204对CCND2的调控作用,揭示上述调控轴与胃癌细胞增殖能力的关系。方法收集浙江省金华市人民医院2016年6月-2019年6月确诊的胃癌组织及癌旁健康组织共10例,利用荧光定量PCR(qPCR)检测UCA1在组织标本中的表达情况。胃癌细胞株MNK-45及SGC-7901分别转染阴性对照siRNA(对照组)及UCA1 siRNA(UCA1敲减组)。CCK-8检测两组细胞增殖活性的变化,Western blotting分析Ki-67、PCNA及Cyclin D1的表达。胃癌细胞株MNK-45及SGC-7901分别转染阴性对照miRNA模拟物(对照组)及miR-204模拟物(miR-204过表达组),qPCR检测靶基因CCND2的表达。构建CCND2-3’UTR的荧光素报告,系统分析miR-204对CCND2的体外抑制活性。RNA免疫沉淀(RIP)实验分析UCA1、miR-204与Ago2蛋白的结合情况。胃癌细胞株MNK-45及SGC-7901分别转染UCA1过表达质粒(UCA1过表达组)、miR-204模拟物(miR-204过表达组)、UCA1与miR-204共转染(联合组)及对照组[即pcDNA3.1(+)空载体与阴性对照miRNA模拟物共转染]。CCK-8检测各组细胞增殖差异,qPCR检测各组细胞CCND2的表达。结果MNK-45及SGC-7901中UCA1敲减后细胞增殖活性高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01),Ki-67、PCNA及Cyclin D1的表达均显著下调。miR-204过表达组MNK-45及SGC-7901细胞增殖活性低于与对照组(P<0.01),而UCA1过表达组细胞的增殖活性高于对照组(P<0.01),差异均有统计学意义。miR-204与UCA1联合组细胞增殖活性高于单纯miR-204过表达组,差异有统计学意义(P<0.01)。RIP实验表明,UCA1与miR-204与Ago2蛋白共结合。荧光素实验报告表明,miR-204过表达组的野生型CCND2-3’UTR荧光素活性低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01),而miR-204过表达组的突变型与对照组荧光素,差异无统计学意义(P>0.05)。miR-204过表达组CCND2表达、细胞活性低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01),UCA1过表达组CCND2表达、细胞增殖活性高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01),联合组CCND2表达及细胞增殖活性与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论UCA1具有促胃癌细胞增殖的作用,其作用与抑制miR-204并上调其靶基因CCND2表达有关。