miR-194通过调控KLF15表达降低缺氧诱导的心肌细胞损伤

目的探讨miR-194对缺氧诱导的心肌细胞损伤的影响及其分子机制。方法建立心肌细胞缺氧组,缺氧条件为37℃、95%N 2+5%CO 2处理48 h,不作任何处理的细胞作为对照(Control)组;设置miR-con组(转染miR-con)、miR-194组(转染miR-194 mimics)、anti-miR-con组(转染anti-miR-con)、anti-miR-194组(转染anti-miR-194)、pcDNA组(转染pcDNA)和pcDNA-KLF15组(转染pcDNA-KLF15);再将anti-miR-con组、anti-miR-194组、pcDNA组和pcDNA-KLF15组细胞进行缺氧处理,记为缺氧+anti-miR-con组、缺氧+anti-miR-194组、缺氧+pcDNA组和缺氧+pcDNA-KLF15组;将miR-194质粒分别和pcDNA、pcDNA-KLF15质粒共转染到正常培养的心肌细胞中再作缺氧处理,分别记为缺氧+miR-194+pcDNA组和缺氧+miR-194+pcDNA-KLF15组;将anti-miR-194质粒分别和si-con质粒、si-KLF15质粒共转染到正常培养的心肌细胞中再做缺氧处理,分别记为缺氧+anti-miR-194+si-con组和缺氧+anti-miR-194+si-KLF15组,转染均采用脂质体法。qRT-PCR检测细胞中miR-194和KLF15 mRNA水平;Western印迹检测蛋白表达水平;噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因实验检测荧光活性。结果缺氧处理的心肌细胞中miR-194高表达,KLF15低表达,缺氧处理抑制心肌细胞存活,诱导细胞凋亡。抑制miR-194表达和过表达KLF15促进缺氧处理的心肌细胞存活并抑制细胞凋亡;miR-194靶向负调控KLF15的表达。沉默KLF15部分逆转miR-194抑制表达对缺氧处理心肌细胞的保护作用;过表达KLF15部分逆转miR-194过表达对缺氧处理心肌细胞中p-STAT3蛋白表达的促进作用。结论抑制miR-194表达能降低缺氧诱导的心肌细胞损伤,其机制可能与调控KLF15及p-STAT3蛋白的表达相关,为心肌细胞损伤的治疗提供新靶点。