miR-645靶向EDN3调控肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的探究微小RNA-645(miR-645)是否通过靶向调控内皮素(EDN)3影响肝癌细胞增殖、迁移及侵袭。方法qRT-PCR法与Western印迹法分别检测miR-645及EDN3 mRNA在不同肝癌细胞及正常肝细胞中的表达;双荧光素酶报告基因系统检测miR-645对EDN3转录活性的影响;噻唑蓝(MTT)实验检测miR-645与EDN3表达对肝癌细胞增殖能力的影响;Transwell迁移及侵袭实验检测miR-645与EDN3表达对肝癌细胞迁移及侵袭能力的影响;Western印迹检测细胞增殖、迁移及侵袭相关蛋白〔细胞周期蛋白(Cyclin)D1、p21、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9〕表达水平。结果与正常肝细胞L02相比,不同肝癌HepG2、SMMC-7721、BEL-7402细胞中miR-645表达水平显著升高(P<0.05),而EDN3 mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05);双荧光素酶报告基因检测结果显示EDN3是miR-645的靶基因;干扰miR-645表达后,肝癌HepG2细胞增殖、迁移及侵袭能力明显降低,CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达明显下调,p21蛋白表达明显上调(P<0.05);抑制EDN3表达后,肝癌HepG2细胞增殖、迁移及侵袭能力明显升高,CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达明显上调,而p21蛋白表达下调(P<0.05)。结论miR-645可靶向调控EDN3表达进而促进肝癌细胞增殖、迁移及侵袭能力。