鸡胚小肠上皮细胞体外培养与纯化

为了优化鸡胚小肠上皮细胞体外培养、纯化方法,本研究利用胶原酶对鸡胚小肠进行体外消化处理,利用酶消化法和细胞反复贴壁法对所培养细胞进行纯化,并绘制了纯化细胞的生长曲线。结果显示:利用1 mg/mL V型胶原酶对16胚龄的鸡胚小肠上皮组织进行体外消化,将获得的分离细胞培养在DMEM(Dulbecco′s modified Eagle medium)细胞培养液中,第2天,上皮细胞与成纤维细胞开始贴壁夹杂生长;第3天,成纤维细胞迅速增殖分化并成为优势细胞,经酶消化法、细胞反复贴壁法纯化后,获得的小肠上皮细胞纯度较高,呈梭状,增殖分化并向四周蔓延;培养至第8天,小肠上皮细胞呈圆形、椭圆形等,汇合单层生长。使用本研究建立的培养纯化方法,可获得纯度较高的鸡胚小肠上皮细胞,细胞培养第5天~第8天为指数生长期,故细胞模型的推荐培养时间为8 d。