TIMP2蛋白抑制TGF-β1诱导宫颈癌细胞EMT的过程

目的探讨人源基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP)2在转化生长因子(TGF)-β1诱导宫颈癌细胞上皮细胞间质化(EMT)中的作用及机制。方法用10 ng/ml TGF-β1培养,诱导宫颈癌细胞EMT。通过细胞计数试剂盒(CCK)-8评估细胞活力,流式细胞术分析细胞凋亡,通过划痕实验评估细胞迁移。Western印迹检测E-钙黏蛋白、波形蛋白、信号转导和转录激活因子(STAT)3,蜗牛家族转录抑制因子(SNAIL)2、p-p70s6k和M2型丙酮酸激酶(PKM2)。结果TGF-β1组E-cadherin表达水平较PBS组明显下降,而波形蛋白表达较PBS组明显升高(均P<0.05)。各剂量TIMP2组24~72 h细胞增殖能力均显著低于PBS组,且呈剂量依赖性(均P<0.05)。TGF-β1组24~72 h细胞增殖能力显著高于PBS组,而TIMP2+TGF-β1组显著低于TGF-β1组(均P<0.05)。TIMP2组24 h后细胞迁移指数显著小于PBS组(P<0.05),TIMP2+TGF-β1组细胞迁移指数显著小于TGF-β1组(P<0.05)。TIMP2组细胞凋亡率显著高于PBS组(P<0.05),而TIMP2+TGF-β1组细胞凋亡率显著高于TGF-β1组(P<0.05)。TGF-β1组PKM2和p70s6k水平显著高于PBS组(P<0.05)。Rapa+TGF-β1组PKM2和p70s6k水平显著高于Rapa组(P<0.05)。TGF-β1组E-cadherin水平显著低于PBS组,而STAT3,SNAIL2,Vimentin水平显著高于PBS组(P<0.05)。TIMP2组E-cadherin水平显著高于PBS组(P<0.05),而其他指标与PBS组比较无显著差异(P>0.05)。TIMP2+TGF-β1组E-cadherin水平显著高于TGF-β1组,而STAT3,SNAIL2,Vimentin水平均显著低于TGF-β组(P<0.05)。同时TIMP2+TGF-β1组p70s6k和PKM2水平均显著低于TGF-β1组(P<0.05)。与TGF-β1组比较,TIMP2+TGF-β1组HeLa细胞形成纺锤体和成纤维细胞形态程度低。结论人源TIMP2处理通过抑制mTOR/p70s6k信号传导从而下调PKM2表达,阻断宫颈癌中TGF-β1诱导的EMT过程。