RT-PCR法微量加样操作优化

目的比较3种不同的内标加样方式对多重实时荧光反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测新型冠状病毒核酸的试验结果及内标异常率的影响,评价3种微量液体加样操作方式对试验结果监控的有效性,以便选择合适的微量液体加样操作方案。方法针对核酸提取环节中试剂和内标的加样,采取3种不同的方式把试验分成3组,每组各检测30批次标本,每批次检测的标本量为42~94份,分别计算3组内标正常和内标异常的标本数,对各组因内标异常而导致的复检进行统计学分析。结果在各组的30个批次检测结果中,A组共检测2644份标本,其中20个批次共62份标本出现内标异常,总复检率为2.24%,B组共检测2641份标本,其中21个批次共83份标本出现内标异常,总复检率为3.14%;C组共检测2723份标本,其中9个批次共11份标本出现内标异常,总复检率为0.40%。C组内标异常的标本数较A、B组明显减少,复检率较A、B组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论基于内标多重实时荧光RT-PCR法进行核酸检测,对于微量的内标加样,使用合适的稀释液进行倍数稀释,放大加样量,可减少微量加样的操作误差,提高检测结果的有效性。