血小板增多对小鼠恶性黑色素瘤转移模型的影响及机制

目的建立小鼠高血小板恶性黑色素瘤转移模型,为研究肿瘤细胞诱导血小板聚集(TCIPA)的体内现象及机制提供稳定的操作平台;探索血小板增多对小鼠恶性黑色素瘤转移模型中肺转移灶、原位瘤、其他脏器转移灶及肿瘤免疫微环境的影响,为临床转移性恶性黑色素瘤的发病机制提供基础研究证据。方法提取鼠源性洗涤血小板。采用7~8周龄雄性C57BL6小鼠,分为高血小板荷瘤组、荷瘤组和对照组,每组8只。高血小板荷瘤组经尾静脉注射洗涤血小板悬液和鼠源性恶性黑色素瘤B16F10细胞悬液,并经原位注射B16F10细胞悬液建立小鼠高血小板恶性黑色素瘤转移模型;荷瘤组在高血小板荷瘤组基础上将洗涤血小板悬液更换为同体积Tyrode′s液;对照组为注射同体积PBS和Tyrode′s液的健康小鼠。比较组间肺重、肺转移灶数量、其他脏器转移灶数量、原位瘤重等指标,探索血小板增多对模型特征的影响。通过流式细胞术检测血小板增多对荷瘤模型肺、脾、肿瘤组织内T细胞、巨噬细胞、NK细胞数量及亚型的影响。通过免疫组化检测血小板增多对肺内M2型巨噬细胞浸润及PDL1表达的影响。结果接种后第14天取材,与对照组比较,荷瘤组、高血小板荷瘤组小鼠均出现肺转移,且高血小板荷瘤组较荷瘤组小鼠肺重增大(162±17 vs 237±66 vs 358±64),肺转移灶数量增多(309±116 vs 776±373),差异具有统计学意义(P<0.05)。此外,与荷瘤组比较,高血小板荷瘤组小鼠肾、肝和结肠转移灶数量均增多,但原位瘤重降低。流式细胞术结果显示,与对照组、荷瘤组比较,高血小板荷瘤组小鼠肺中F4/80+CD206+巨噬细胞比例增高(P<0.05),但在脾和原位瘤内比例降低。CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞、FoxP3^(+)Treg细胞、NK细胞、NKT细胞组间差异无统计学意义。免疫组化结果显示,高血小板荷瘤组小鼠肺内F4/80,CD206和PDL1表达均高于荷瘤组(P<0.05)。结论血小板增多促进小鼠恶性黑色素瘤发生肺转移,其机制与血小板参与调节宿主巨噬细胞分布,上调肺转移灶内M2型巨噬细胞及PDL1表达相关。