PTEN参与介导沉默EN2诱导肝癌细胞凋亡

目的探讨磷脂酶和张力蛋白同源物(PTEN)在沉默EN2诱导肝癌细胞凋亡中的作用。方法在人肝癌细胞HuH-7中分别转染EN2 siRNA、siRNA control、PTEN siRNA和EN2 siRNA,用实时荧光定量-聚合酶链反应(PCR)和Western印迹检测细胞中EN2、PTEN表达水平。四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力变化,细胞克隆实验检测细胞克隆形成能力,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术测定细胞凋亡变化,Western印迹检测细胞中酶切含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3和Caspase-9蛋白水平,JC-1法检测细胞线粒体膜电位变化,Western印迹检测胞质中细胞色素(Cyt)-C蛋白水平。结果EN2 siRNA可以明显下调HuH-7细胞中EN2 mRNA和蛋白表达水平,siRNA control对细胞中EN2 mRNA和蛋白表达水平没有影响。沉默EN2后的HuH-7细胞中的PTEN表达水平升高。PTEN siRNA和EN2 siRNA共转染后的HuH-7细胞中PTEN表达水平较单纯转染EN2 siRNA的细胞明显降低。沉默EN2后的HuH-7细胞活性降低,细胞凋亡增多,并且细胞中酶切Caspase-3及酶切Caspase-9水平升高,细胞克隆形成能力也降低,线粒体膜电位明显降低,存在于胞质中的CyC增加。PTEN siRNA和EN2 siRNA共转染后的HuH-7细胞与单纯转染EN2 siRNA的细胞比较,细胞活性升高,克隆形成能力也升高,凋亡减少,存在于胞质内的CytC含量降低,酶切Caspase-3和酶切Caspase-9蛋白减少,膜电位增加。结论PTEN参与介导沉默EN2诱导肝癌细胞凋亡过程,沉默EN2可通过促进PTEN表达激活线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡发生。