低氧培养人诱导性多能干细胞来源间充质干细胞的生物学特性

Biological characteristics of human induced pluripotent stem cells derived mesenchymal stem cells cultured in hypoxia

人诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)最初由Takahashi和Yamanaka[1]制备。本研究旨在观察低氧环境对iPSC来源间充质干细胞(iPSC derived mesenchymal stem cells,iMSCs)形态、增殖、分化、细胞因子分泌及凋亡方面的影响。一、材料与方法1.试剂与方法:使用间充质祖细胞试剂盒,将正常人iPSCs逐步分化为iMSCs。鉴定P1代及P5代iMSCs表面标志物。取P3,P5,P7代iMSCs,随机分为常氧组和低氧组,置于氧体积分数分别为21%和5%的培养箱中培养,计算细胞群体倍增时间。成骨及成脂诱导培养基诱导P3代常氧与低氧组iMSCs,镜下观察分化情况。实时荧光定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)法检测P5代对数生长期常氧组和低氧组iMSCs胶质细胞源性神经营养因子,成纤维细胞生长因子2、睫状神经营养因子、肝细胞生长因子mRNA表达。细胞程序性坏死诱导试剂盒(×1000)诱导iMSCs凋亡,异硫氰酸荧光素细胞凋亡检测试剂盒检测低氧对iMSCs凋亡的影响。