MiR-32对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制

Effect and mechanism of Mir-32 on proliferation,migration and invasion of non-small cell lung cancer cells

目的探讨miR-32靶向CCNE2调控非小细胞肺癌(NSCLC)细胞的增殖、迁移和侵袭的机制。方法实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测30例NSCLC患者癌组织及其匹配癌旁组织和支气管上皮细胞株16-HBE及NSCLC细胞株A549、H460和H1299中miR-32 mRNA表达水平;选择A549和H1299细胞为研究对象,将细胞随机分8组:NC组(转染miR-NC)、miR-32组(转染miR-32 mimics)、NC inhibitor组(转染miR-32-NC)、miR-32 inhibitor组(转染miR-32 inhibitor)、si-NC组(转染对照干扰RNA)、si-CCNE2组(转染CCNE2干扰RNA)、miR-32+vector(共转染miR-32 mimics和pcDNA3.1)、miR-32+CCNE2组(共转染miR-32 mimics和pcDNA3.1-CCNE2),转染按照Lipofectamine^(TM)2000试剂进行。qRT-PCR检测转染效果,qRT-PCR和Western印迹分别检测CCNE2 mRNA和蛋白表达水平;双荧光素酶报告基因实验和Western印迹检测miR-32与CCNE2的靶向作用关系;采用CCK-8法和Transwell法检测细胞增殖、迁移和侵袭能力;将转染空载的或miR-32过表达的慢病毒表达载体的H1299细胞在无菌条件下注射到8周龄的雌性BALB/c裸鼠皮下形成肿瘤异种移植,并定期测量肿瘤体积,30 d后处死小鼠,测量肿瘤重量,检测肿瘤细胞中CCNE2的表达。结果与NSCLC患者癌旁组织、支气管上皮细胞株16-HBE相比,NSCLC组织、A549和H1299中miR-32表达显著降低(P<0.05);过表达miR-32和沉默CCNE2可抑制NSCLC细胞的增殖、迁移和侵袭(均P<0.05);荧光素酶报告基因实验表明CCNE2是miR-32的靶基因,miR-32过表达可负调控CCNE2表达,沉默miR-32可使细胞中CCNE2的表达上调;CCNE2可减弱miR-32对NSCLC细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用;异种移植瘤实验结果表明miR-32在体内可明显抑制异种移植瘤的生长,且肿瘤细胞中CCNE2的表达明显下调。结论miR-32可通过下调CCNE2抑制NSCLC细胞株A549和H1299的增殖、迁移和侵袭。