非洲猪瘟病毒MGF505-3R蛋白的原核表达研究

为获得非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)体外诱导表达的MGF505-3R蛋白。实验依据GenBank中报道的MGF505-3R基因序列设计引物,引入His标签,以ASFV基因全序列为模板扩增目的基因。将目的基因克隆至原核表达载体pGEX-6p-1,并转入大肠杆菌Transetta(DE3)中。用1 mmol/L异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达菌体,分别取上清液和沉淀进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)凝胶电泳分析。将表达的蛋白经过Ni-NTA琼脂糖亲和层析纯化。免疫印迹实验(Western-blot)分析蛋白的活性。克隆得到的MGF505-3R基因片段长度为843 bp,与原序列一致。蛋白在沉淀中以包涵体的形式表达,相对分子质量约为53 ku。纯化后可得到纯度较高的MGF505-3R重组蛋白。免疫印迹实验结果呈阳性。MGF505-3R蛋白可以在大肠杆菌Transetta(DE3)中表达并纯化,蛋白具有良好的表达活性。近几年,多基因家族(Multigene Families,MGFs)基因缺失疫苗被认为是目前ASF疫苗研制的主要方向,本研究获得的MGF505-3R重组蛋白将为ASFV MGF505-3R蛋白的研究提供基础,也为基因缺失疫苗相关免疫学方面的检测提供前期技术储备。