柔肝化纤颗粒诱导骨髓间充质干细胞转化为肝细胞的作用

目的观察柔肝化纤颗粒诱导分离培养大鼠的骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells BMSCs)定向分化为肝样细胞的作用。方法利用体外培养的BMSCs,采用全骨髓贴壁法分离原代大鼠BMSCs,第三代细胞通过流式细胞仪分析细胞表面(CD29、CD34、CD44)、诱导分化为肝样细胞鉴定BMSCs特征;采用柔肝化纤颗粒含药血清及粒细胞集落刺激因子(G-CSF)两种诱导方案连续培养BMSCs 21天,加生理盐水作为对照组。利用qPCR观察甲胎蛋白(α-fetoprotein AFP),白蛋白(albumia ALB)、细胞角蛋白(cytokeratin18,CK18)及趋化因子-4(chemokine receptor4 CXCR4)mRNA的表达;Western Blot检测CXCR4蛋白的表达;采用激光共聚焦观察分别干预0、7、14、21天后的细胞形态;采用PAS法检测肝样细胞糖原形成;采用油红O染色观察染色细胞的脂代谢情况;采用尿素试剂盒测量产生尿素的浓度。结果全骨髓贴壁法分离的BMSCs高表达白细胞分化抗原(Cluster of differentiation,CD)29、44,低表达CD34;柔肝化纤颗粒含药血清和G-CSF诱导均可提高BMSCs表达AFP、ALB、CK18、CXCR4、SDF-1αmRNA表达水平,Western Blot显示可上调CXCR4蛋白的表达。诱导21天后可检测到AFP和CK18的表达,可见细胞合成糖原颗粒、大量脂滴且具有药物合成及尿素代谢功能,观察到BMSCs内SDF-1α和CXCR4表达上调。结论柔肝化纤颗粒可诱导大鼠BMSCs向肝样细胞分化,其机制与上调SDF-1α/CXCR4信号通路有关。