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OpaR对副溶血弧菌pilABCD操纵子的调控研究 被引量：2

Transcriptional regulation of pilABCD by OpaR in Vibrio parahaemolyticus
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摘要 目的研究副溶血弧菌群体感应(quorum sensing,QS)系统核心调控子OpaR对pilABCD的转录。方法提取副溶血弧菌野生株(wild-type,WT)和opaR突变株(ΔopaR)的总RNA,采用实时定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)研究OpaR对pilA(pilABCD首基因)的转录调控;将pilABCD上游调控区DNA序列克隆入pHRP309质粒的β-半乳糖苷酶基因上游,构建LacZ重组质粒,并将该重组质粒转入WT和ΔopaR中制备LacZ菌株,通过LacZ报告基因融合试验研究OpaR对pilA的调控以及pilA的时相表达。提取WT株总RNA,采用引物延伸试验研究pilABCD的转录起始位点;PCR扩增pilABCD上游调控区DNA序列,并纯化His-OpaR蛋白,通过凝胶阻滞试验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)研究His-OpaR与靶DNA片段是否有直接的结合作用,并进一步采用DNaseⅠ足迹试验分析其结合位点。结果qPCR和LacZ报告基因融合试验显示OpaR对pilABCD的转录具有激活作用,pilA的表达水平随培养时间的延长而持续升高;引物延伸结果显示pilABCD只有一个转录起始位点T(-155);EMSA和DNaseⅠ足迹试验结果显示OpaR对位于pilA的翻译起始位点上游-246~-197 bp和-181~-131 bp之间的DNA序列具有结合活性。结论OpaR对pilABCD的转录具有直接的激活活性。
作者 陆仁飞 孙君芳 薛星帆 张苗苗 李雪 吴齐敏 张义全 Lu Renfei;Sun Junfang;Xue Xingfan;Zhang Miaomiao;Li Xue;Wu Qimin;Zhang Yiquan(Department of Clinical Laboratory,Nantong Third Hospital Affiliated to Nantong University,Nantong 212001,China;Clinical Laboratory Diagnostics,School of Medicine,Jiangsu University,Zhenjiang 212013,China;Department of Preventive Medicine and Public Health,Wuxi School of Medicine,Jiangnan University,Wuxi 214122,China)
机构地区 南通市第三人民医院检验科 江苏大学医学院临床检验诊断学 江南大学无锡医学院公共卫生与预防医学系
出处 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期906-911,共6页 Chinese Journal of Microbiology and Immunology
基金 中国博士后科学基金第68批面上资助(2020M681513) 江苏省博士后科研资助计划(2020Z102)。
关键词 副溶血弧菌 群体感应 转录调控 OpaR pilABCD
分类号 R378.3 [医药卫生—病原生物学]
  • 相关文献

参考文献1

二级参考文献16

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共引文献18

同被引文献4

引证文献2

二级引证文献1

中华微生物学和免疫学杂志
2021年 第12期

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