猪圆环病毒3型河北株Cap蛋白的原核表达与鉴定

为了制备猪圆环病毒3型cap蛋白,依据NCBI发表的PCV3全基因序列(MK105924)设计了一对特异性引物,通过PCR方法获取PCV3-CAP蛋白基因,将纯化的PCV3-CAP蛋白基因插入到pET-32a(+)质粒中构建重组质粒pET-32a(+)-PCV3-Cap,将构建成功的质粒转化到表达菌株BL21(DE3),经1mmol/mL的IPTG 37℃诱导表达后,利用SDS-PAGE检测重组蛋白的表达情况,利用Western blot方法分别检测重组蛋白的免疫原性,对影响重组蛋白表达的IPTG浓度和诱导时间进行分析。结果表明:PCR产物通过琼脂糖凝胶电泳检测发现条带位置正确,重组质粒pET-32a(+)-PCV3-Cap测序正确,含有重组质粒pET-32a(+)-PCV3-Cap的表达菌株BL21(DE3)在诱导表达后,经SDS-PAGE检测证明有重组蛋白表达,重组蛋白主要以Wes TM全自动蛋白表达分析系统结果表明该重组蛋白与PCV3多克隆抗体发生特异性反应,说明成功制备了PCV3 Cap重组蛋白。