摘要
目的 探讨肉桂酰雷公藤内酯醇(T32)对γ干扰素诱导蛋白10(IP-10)在SV40MES13小鼠肾小球系膜细胞表达及促增殖作用的影响。方法 采用(2~30)ng/mL T32和(1~500)ng/mL IP-10与SV40MES13细胞共培养24 h,利用CCK-8法检测细胞生存率确定T32和IP-10最佳处理剂量;将对数生长期的SV40MES13细胞随机分为空白组、 1000 U/mLγ干扰素(IFN-γ)刺激组、 IFN-γ联合10μmol/L吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)干预组和IFN-γ联合(2~20)ng/mL T32干预组。IFN-γ刺激24 h后,通过实时荧光定量PCR检测SV40MES13细胞IP-10 mRNA水平,ELISA检测SV40MES13细胞培养上清液IP-10分泌量;IFN-γ刺激20 min后,应用Western blot法检测SV40MES13细胞核因子κB (NF-κB)信号通路相关蛋白核因子κB p65(NF-κB p65)、核因子κB抑制物α(IκBα)及其磷酸化蛋白p-NF-κB p65、 p-IκBα的表达。结果 IFN-γ刺激可促进SV40MES13细胞IP-10 mRNA和蛋白表达增加,与空白组相比,NF-κB p65、 IκBα蛋白的磷酸化水平明显增加。采用特异性通路抑制剂PDTC阻断NF-κB信号通路后,与IFN-γ刺激组相比,SV40MES13细胞IP-10 mRNA和蛋白表达明显降低,NF-κB p65、 IκBα蛋白磷酸化水平下降。与IFN-γ刺激组相比,经(2~20)ng/mL T32干预后,SV40MES13细胞IP-10 mRNA和蛋白表达明显降低,NF-κB p65、 IκBα蛋白磷酸化水平分别下降44.22%和48.59%。(1~500)ng/mL IP-10与SV40MES13细胞共同孵育24 h后,细胞生存率提高,IP-10剂量为10 ng/mL时细胞生存率为119.83%,随后进入平台期;经(4~20)ng/mL T32干预后,细胞生存率与10 ng/mL IP-10刺激组相比明显降低。结论 IFN-γ诱导SV40MES13细胞表达IP-10的作用可被肉桂酰雷公藤内酯醇通过阻断NF-κB信号通路而下调,并抑制IP-10的促增殖作用。
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第1期60-65,共6页
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology
基金
福建省自然科学基金(2017J01309)。