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高中综合实验设计——以"表达和纯化红色荧光蛋白标记的类弹性蛋白"为例

Comprehensive experimental design for high school:Talcing the expression and purification of fusion protein mCherry-elastin as an example
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摘要 以类弹性蛋白(elastin-like polypeptide,ELP)作为非色谱纯化标签,分离纯化红色荧光蛋白mCherry.ELP与△I-CM(intein cleavage mutant)的N端连接,mCherry片段与△I-CM的C端连接,在ELP的N端插入GFP片段,用于检测蛋白纯度.采用低温诱导的方式实现重组蛋白在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中可溶性表达.可逆相变循环,分离纯化融合蛋白GFP-ELP-IN-mCherry,通过改变温度和pH诱导内含肽自剪切,再利用ELP的特性去除GFP-ELP-IN标签,得到目的蛋白mCherry.学生通过本实验可掌握蛋白质分离纯化技术,提高了动手实践的能力.
作者 张蕾 Zhang Lei
机构地区 徐汇中学
出处 《生物学通报》 CAS 2022年第4期46-49,共4页 Bulletin of Biology
关键词 类弹性蛋白 内含肽 生物工程 红色荧光蛋白
分类号 G63 [文化科学—教育学]
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参考文献5

二级参考文献74

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共引文献9

生物学通报
2022年 第4期

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