miR-335靶向调控CCL5对AngⅡ诱导心肌成纤维细胞纤维化的影响

目的探讨微小RNA(miR-335)靶向调控趋化因(CCL)5对血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导心肌成纤维细胞(CFs)纤维化的影响。方法体外培养CFs,采用AngⅡ诱导CFs建立纤维化模型,质粒miR-335 mimic转染细胞并分为空白对照组,AngⅡ诱导组,AngⅡ+NC组,AngⅡ+miR-335 mimic组,实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-335、CCL5 mRNA相对表达水平,Western印迹检测CCL5蛋白相对表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组中Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)、Ⅲ型胶原(COL-Ⅲ)、转化生长因子(TGF)-β,结缔组织生长因子(CTGF)含量,双荧光素酶标记实验验证miR-335与CCL5靶向关系。结果与空白对照组相比,AngⅡ组、AngⅡ+NC组CFs细胞中miR-335相对表达水平显著降低,CCL5蛋白和mRNA相对表达水平、细胞增殖率、COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、TGF-β、CTGF含量显著升高(均P<0.05)。与AngⅡ组、AngⅡ+NC组相比,AngⅡ+miR-335 mimic组细胞中miR-335相对表达水平显著升高,CCL5蛋白和mRNA相对表达水平、细胞增殖率、COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、TGF-β、CTGF含量均显著降低(均P<0.05)。miR-335 mimic+WT-CCL53′UTR组荧光素酶相对活性显著低于miR-335 NC+WT-CCL53′UTR组(P<0.05)。结论miR-335可能通过靶向调控CCL5,抑制其蛋白表达,抑制AngⅡ诱导的CFs纤维化。