METTL14在CML细胞中的表达及其与PKM剪接体间的相关性分析

目的探讨METTL14在伊马替尼(Imatinib,IM)敏感和耐药慢粒(chronic myeloid leukemia,CML)细胞中的表达差异,并分析其与PKM剪接体间的相关性。方法收集南昌大学第二附属医院门诊的健康对照组、CML慢性期、CML急变期各5例外周血或骨髓,运用RNA转录组测序(RNA-seq)技术进行测序,筛选差异表达基因;另收集30例IM敏感的慢性期CML患者外周血或骨髓作为IM敏感组,10例IM耐药急变期标本作为耐药组,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证40例临床样本中METTL14基因差异表达,并采用Spearman法分析METTL14和PKM剪接体的相关性,同时通过SRAMP网址预测PKM基因是否含有m6A修饰位点。结果RNA测序结果显示,分别与对照组和慢性期比,急变期基因表达谱有很大的差异,且差异基因显著富集的是剪接体功能通路;METTL14 mRNA在IM敏感组和耐药组中相对表达量分别是(13.720±2.512)和(21.450±1.426),差异有统计学意义(P=0.028)。qRT-PCR结果显示METTL14 mRNA在敏感组中的表达较耐药组显著降低(P<0.001);Spearman相关分析表明,METTL14 mRNA表达水平与PKM2/PKM1比值呈正相关(r=0.495,P=0.005);SRAMP网址预测PKM基因9号外显子区域高度富集m6A修饰位点。结论高表达的METTL14介导的m6A修饰PKM基因外显子9使其高度甲基化而不被剪接,PKM1生成减少,PKM2相应增多,从而促进CML耐药,为探讨CML耐药机制和治疗靶点提供新思路。