死精子对猪精液17℃液态保存的影响

为揭示17℃液态保存过程中猪精子质量和功能持续下降的机制,本试验采集9头在役的不同品种公猪(长白、大白和杜洛克)的精液48份,使用BTS溶液等体积稀释后分为3份,其中的两份分别使用反复冻融(方法 A)和低渗处理(方法 B)方法杀死精子并离心获得稀释液A和B,将另一份精液样品离心分离精浆(Seminal Plasma,SP)和精子。分别使用不同体积比例稀释液A:精子(1:1、4:1和19:1),稀释液B:精子(1:1、4:1和19:1),SP:精子(1:1和4:1)和BTS:精子(4:1)重悬离心后的猪精子,以SP和BTS重悬的精液及原精液样品作为对照,所有精液样品于17℃下保存3 d。结果表明:随着保存时间的延长,所有稀释液和稀释倍数处理均损伤了精子活率和活力(P<0.01)及质膜完整性(P<0.05)。稀释液A比B引起的精子脂质过氧化水平更低(P<0.05)。5倍稀释精子,稀释液B的精子活力较BTS组降低(P<0.05),稀释液B引起的精子细胞内活性氧族(ROS)水平比稀释液A更高(P<0.05),而精液总抗氧化物(TAC)水平更低(P<0.05)。与其他稀释倍数处理比,5倍稀释引起的精子脂质过氧化水平更低(P<0.05)。稀释液A组,20倍稀释比其他稀释倍数引起的精子细胞内ROS水平更高(P<0.05),精液TAC水平更低(P<0.05)。稀释液B组,5倍稀释比其他稀释倍数降低精子活力(P<0.05),5倍和2倍稀释精液TAC水平均低于20倍稀释组(P<0.05)。相关性分析表明,精液TAC水平与精子质膜完整性正相关(R=0.147,P<0.05),与精子凋亡水平负相关(R=-0.183,P<0.05)。综上,在17℃液态保存过程中,死精子可能通过引起活精子细胞内ROS水平升高或细胞膜脂质过氧化造成活精子质量和功能的损伤,而精液中的TAC可能在对抗以上损伤中发挥积极作用。