基于微流控芯片的实时荧光定量PCR技术快速检测血小板制剂细菌污染

目的通过微流控芯片检测平台应用Taqman探针的实时定量PCR技术对血小板制剂中的细菌16S rDNA进行检测,探讨该体系在血小板细菌污染的快速检测的应用。方法向机采血小板中人为添加一定浓度的金黄色葡萄球菌或铜绿假单胞菌,模拟成10~2~10~8 CFU/mL细菌污染的血液标本,经10倍梯度稀释后进行细菌计数及微流控芯片FQ-PCR检测细菌16S rDNA,并对检测体系进行特异性、检出限和重复性评价。结果微流控芯片FQ-PCR体系特异性较强,探针和引物对阳性标本均有反应,与空白对照无反应。对污染血小板的金黄色葡萄球菌,该方法的最低检出限为865 CFU/mL,而对铜绿假单胞菌的最低检出限为885 CFU/mL。当金黄色葡萄球菌与铜绿假单胞菌浓度分别达到最低检测限时,空白对照与各细菌组的Ct值之差分别为4.35±1.01和2.03±0.61。各浓度菌液提取的DNA进行微流控芯片FQ-PCR扩增后的Ct值计算重复性指数在0.012~0.052范围内。结论微流控芯片FQ-PCR检测平台可特异、有效地检出血小板中的细菌污染,为确保输血安全提供帮助。