Tim-4对kupffer细胞分泌Th1/Th2类细胞因子及抗原呈递功能的影响

目的探讨T细胞免疫球蛋白黏蛋白(Tim)-4对肝脏巨噬细胞kupffer细胞(KCs)分泌Th1/Th2类细胞因子及抗原呈递功能的影响。方法以非连续梯度离心法体外分离培养BALB/c小鼠KCs,随机分为对照组、过表达Tim-4组、Tim-4-shRNAs组、Tim-4单克隆抗体组,以过表达Tim-4、Tim-4-shRNAs质粒及Tim-4单克隆抗体处理KCs,以100 ng/ml脂多糖(LPS)活化后,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)及Western印迹检测各组细胞Tim-4表达;免疫组化鉴定KCs,台盼蓝染色判断活率;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞培养液中Th1类细胞因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、干扰素(IFN)-γ及Th2类细胞因子IL-10水平;流式细胞仪检测KCs表面共刺激分子(MHC)-Ⅱ、CD80、CD86、CD40表达水平;分离BALB/c小鼠脾细胞悬液,制备纯化T细胞,与上述各组KCs共培养,噻唑蓝(MTT)法检测T细胞增殖情况;膜联蛋白异硫氰酸荧光素Ⅴ/碘化丙啶(AnnexinV-FITC/PI)法观察T淋巴细胞凋亡情况,进而检测KCs抗原呈递功能。结果免疫组化结果显示KCs表面特异性分子CD68表达强阳性,台盼蓝染色结果显示KCs拒染蓝染,其活性良好。与对照组相比,过表达Tim-4组细胞Tim-4表达、IL-10水平、T细胞凋亡率明显升高,TNF-α、IL-1β、IFN-γ水平明显降低,MHC-Ⅱ、CD80、CD86、CD40表达水平明显降低,T细胞相对增殖率明显降低(均P<0.05);Tim-4-shRNAs组细胞Tim-4表达、IL-10水平、T细胞凋亡率明显降低,TNF-α、IL-1β、IFN-γ水平明显升高,MHC-Ⅱ、CD80、CD86、CD40表达水平明显升高,T细胞相对增殖率明显升高(均P<0.05);Tim-4单克隆抗体组细胞Tim-4表达无明显变化(P>0.05),其他指标变化趋势与Tim-4-shRNAs组相同。结论上调Tim-4可促进KCS分泌Th2类细胞因子,抑制其分泌Th1类细胞因子,降低其抗原呈递功能。