大豆异黄酮协同索拉非尼对宫颈癌Hela细胞增殖、迁移的影响及机制

Effect and mechanism of soybean isoflavones combined with sorafenib on proliferation and migration of cervical carcinoma Hela cells

目的探讨大豆异黄酮协同索拉非尼对宫颈癌Hela细胞的增殖、迁移的影响及机制。方法取对数生长期Hela细胞随机分为对照组、大豆异黄酮组、1 mmol·L^(-1)索拉非尼组、2 mmol·L^(-1)索拉非尼组、4 mmol·L^(-1)索拉非尼组、6 mmol·L^(-1)索拉非尼组、1 mmol·L^(-1)索拉非尼+大豆异黄酮组、2 mmol·L^(-1)索拉非尼+大豆异黄酮组、4 mmol·L^(-1)索拉非尼+大豆异黄酮组、6 mmol·L^(-1)索拉非尼+大豆异黄酮组,应用噻唑蓝法检测各组细胞增殖情况,划痕实验检测对照组、大豆异黄酮组、2 mmol·L^(-1)索拉非尼组、2 mmol·L^(-1)索拉非尼+大豆异黄酮组、4 mmol·L^(-1)索拉非尼组、4 mmol·L^(-1)索拉非尼+大豆异黄酮组细胞迁移情况,实时荧光定量-聚合酶链反应法检测对照组、大豆异黄酮组、4 mmol·L^(-1)索拉非尼组、4 mmol·L^(-1)索拉非尼+大豆异黄酮组细胞中血管内皮生长因子-C(VEGF-C)mRNA相对表达量,Western blot法检测对照组、大豆异黄酮组、4 mmol·L^(-1)索拉非尼组和4 mmol·L^(-1)索拉非尼+大豆异黄酮组细胞中VEGF-C蛋白相对表达量。结果1 mmol·L^(-1)索拉非尼组、2 mmol·L^(-1)索拉非尼组、4 mmol·L^(-1)索拉非尼组、6 mmol·L^(-1)索拉非尼组、1 mmol·L^(-1)索拉非尼+大豆异黄酮组、2 mmol·L^(-1)索拉非尼+大豆异黄酮组、4 mmol·L^(-1)索拉非尼+大豆异黄酮组、6 mmol·L^(-1)索拉非尼+大豆异黄酮组细胞增殖抑制率均高于对照组和大豆异黄酮组(P<0.05);大豆异黄酮组与对照组细胞增殖抑制率比较差异无统计学意义(P>0.05);不同浓度索拉非尼组和不同浓度索拉非尼+大豆异黄酮组细胞增殖抑制率随索拉非尼浓度的增加呈增高趋势(P<0.05);1 mmol·L^(-1)索拉非尼组、2 mmol·L^(-1)索拉非尼组、4 mmol·L^(-1)索拉非尼组、6 mmol·L^(-1)索拉非尼组细胞增殖抑制率分别高于对应的1 mmol·L^(-1)索拉非尼+大豆异黄酮组、2 mmol·L^(-1)索拉非尼+大豆异黄酮组、4 mmol·L^(-1)索拉非尼+大豆异黄酮组、6 mmol·L^(-1)索拉非尼+大豆异黄酮组(P<0.05)。2 mmol·L^(-1)索拉非尼组、2 mmol·L^(-1)索拉非尼+大豆异黄酮组、4 mmol·L^(-1)索拉非尼组、4 mmol·L^(-1)索拉非尼+大豆异黄酮组细胞迁移抑制率均显著高于对照组和大豆异黄酮组(P<0.05);4 mmol·L^(-1)索拉非尼组细胞迁移抑制率显著高于2 mmol·L^(-1)索拉非尼组,4 mmol·L^(-1)索拉非尼+大豆异黄酮组细胞迁移抑制率显著高于2 mmol·L^(-1)索拉非尼+大豆异黄酮组(P<0.05);2 mmol·L^(-1)索拉非尼+大豆异黄酮组细胞迁移抑制率显著高于2 mmol·L^(-1)索拉非尼组,4 mmol·L^(-1)索拉非尼+大豆异黄酮组细胞迁移抑制率显著高于4 mmol·L^(-1)索拉非尼组(P<0.05)。4 mmol·L^(-1)索拉非尼组、4 mmol·L^(-1)索拉非尼+大豆异黄酮组细胞VEGF-C mRNA和蛋白相对表达量均低于对照组和大豆异黄酮组(P<0.05);对照组与大豆异黄酮组细胞中VEGF-C mRNA和蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05);4 mmol·L^(-1)索拉非尼+大豆异黄酮组细胞中VEGF-C mRNA和蛋白相对表达量低于4 mmol·L^(-1)索拉非尼组(P<0.05)。结论大豆异黄酮协同索拉非尼可通过降低VEGF-C基因和蛋白质表达抑制宫颈癌Hela细胞的增殖、迁移能力,且随索拉菲尼浓度升高抑制效果增强。

Objective To investigate the effect of soybean isoflavones combined with sorafenib on the proliferation,migration of cervical carcinoma Hela cells and its mechanism.Methods The Hela cells in logarithmic growth stage were randomly divided into control group,soybean isoflavones group,1 mmol·L^(-1) sorafenib group,2 mmol·L^(-1) sorafenib group,4 mmol·L^(-1) sorafenib group,6 mmol·L^(-1) sorafenib group,1 mmol·L^(-1) sorafenib+soybean isoflavones group,2 mmol·L^(-1) sorafenib+soybean isoflavones group,4 mmol·L^(-1) sorafenib+soybean isoflavones group,and 6 mmol·L^(-1) sorafenib+soybean isoflavones group,the cell proliferation in the each group was detected by Thiazole blue method,the cell migration in the control group,soybean isoflavones group,2 mmol·L^(-1) sorafenib group,2 mmol·L^(-1) sorafenib+soybean isoflavones group,4 mmol·L^(-1) sorafenib group,4 mmol·L^(-1) sorafenib+soybean isoflavones group was detected by scratch test,the relative expression of vascular endothelial growth factor C(VEGF-C)mRNA in the cells in the control group,soybean isoflavones group,4 mmol·L^(-1) sorafenib group,4 mmol·L^(-1) sorafenib+soybean isoflavones group was detected by and fluorescence quantitative polymerase chain reaction,the relative expression of VEGF-C protein in the cells in the control group,soybean isoflavones group,4 mmol·L^(-1) sorafenib group and 4 mmol·L^(-1) sorafenib+soybean isoflavones group was detected by Western blot.Results The cell proliferation inhibition rates in the 1 mmol·L^(-1) sorafenib group,2 mmol·L^(-1) sorafenib group,4 mmol·L^(-1) sorafenib group,6 mmol·L^(-1) sorafenib group,1 mmol·L^(-1) sorafenib+sorbean isoflavones group,2 mmol·L^(-1) sorafenib+sorbean isoflavones group,4 mmol·L^(-1) sorafenib+sorbean isoflavones group and 6 mmol·L^(-1) sorafenib+soybean isoflavones group were significantly higher than that in the control group and soybean isoflavones group(P<0.05);there was no significant difference in the cell proliforation inhibition rate between the soybean isoflavones group and control group.The cell proliferation inhibition rate in the different concentrations of sorafenib group and different concentrations of sorafenib+soybean isoflavones group significantly increased with the increase of concentration of sorafenib(P<0.05).The cell proliferation inhibition rates in the 1 mmol·L^(-1) sorafenib group,2 mmol·L^(-1) sorafenib group,4 mmol·L^(-1) sorafenib group and 6 mmol·L^(-1) sorafenib group were significantly higher than that in the 1 mmol·L^(-1) sorafenib+soybean isoflavones group,2 mmol·L^(-1) sorafenib+soybean isoflavones group,4 mmol·L^(-1) sorafenib+soybean isoflavones group and 6 mmol·L^(-1) sorafenib+soybean isoflavones group,respectively(P<0.05).The cell migration inhibition rate in the 2 mmol·L^(-1) sorafenib group,2 mmol·L^(-1) sorafenib+soybean isoflavones group,4 mmol·L^(-1) sorafenib group and 4 mmol·L^(-1) sorafenib+soybean isoflavones group were significantly higher than that in the control group and soybean isoflavones group(P<0.05);the cell migration inhibition rate in the 4 mmol·L^(-1) sorafenib group was significantly higher than that in the 2 mmol·L^(-1) sorafenib group(P<0.05),and the cell migration inhibition rate in the 4 mmol·L^(-1) sorafenib+soybean isoflavones group was significantly higher than that in the 2 mmol·L^(-1) sorafenib+soybean isoflavones group(P<0.05);the cell migration inhibition rate in the 2 mmol·L^(-1) sorafenib+soybean isoflavones group was significantly higher than that in the 2 mmol·L^(-1) sorafenib group,and the cell migration inhibition rate in the 4 mmol·L^(-1) sorafenib+soybean isoflavones group was significantly higher than that in the 4 mmol·L^(-1) sorafenib group(P<0.05).The relative expression of VEGF-C mRNA and protein in the 4 mmol·L^(-1) sorafenib group and the 4 mmol·L^(-1) sorafenib+soybean isoflavones group were significantly lower than those in the control group and soybean isoflavones group(P<0.05);there was no significant difference in the relative expression of VEGF-C mRNA and protein between the control group and the soybean isoflavones group(P>0.05);the relative expressions of VEGF-C mRNA and protein in the 4 mmol·L^(-1) sorafenib+soybean isoflavones group were significantly lower than that in the 4 mmol·L^(-1) sorafenib group(P<0.05).Conclusion Soybean isoflavones combined with sorafenib can inhibit the proliferation and migration of Hela cells by reducing the expression of VEGF-C gene and protein,and the inhibitory effect is enhanced with the increase of the concentration of sorafenib.