七氟烷预处理介导miR-148b-3p对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响

目的探讨七氟烷(Sevo)预处理介导miR-148b-3p对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响。方法将45只SPF级健康成年雄性SD大鼠随机分为5组:Sham组、MCAO组、miR-148b-3p antagomir组、Sevo组和antagomir+Sevo组,使用线栓法建立大脑中动脉闭塞(MCAO)大鼠模型用作脑缺血再灌注(I/R)损伤的体内模型。分别通过real time RT-PCR、Western印迹检测miR-148b-3p和双特异性磷酸酶(DUSP)1在大鼠大脑皮层中的表达情况。Longa法评价大鼠神经功能损伤;Y迷宫实验检测新异臂进入次数;采用2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色法计算各组脑含水率;苏木素-伊红(HE)染色检测大脑皮层组织损伤。利用Western印迹检测大鼠皮层缺血区活化的胱天蛋白酶(cleaved caspase)-3和cleaved caspase-9的表达。荧光素酶报告实验用于证实miR-148b-3p和DUSP1之间的靶向关系。结果与Sham组比较,MCAO组大脑皮层区miR-148b-3p表达明显上调,DUSP1表达明显下调,犯错次数、神经功能评分,脑含水量和细胞凋亡率均明显升高,新异臂进入次数明显降低,cleaved caspase-3、-9表达水平明显升高。与MCAO组比较,miR-148b-3p antagomir组、Sevo组、antagomir+sevo组miR-148b-3p表达明显下调,DUSP1表达明显上调,犯错次数、神经功能评分、脑含水量和细胞凋亡率均明显降低,新异臂进入次数明显增加,cleaved caspase-3、-9表达水平明显降低。miR-148b-3p通过与皮质神经元中DUSP1的3′UTR结合而抑制DUSP1的表达,而Sevo介导的DUSP1表达增加被miR-148b-3p过表达所抵消。结论Sevo预处理可能通过抑制miR-148b-3p对大鼠脑I/R损伤产生保护作用。