miR-455对Omi/HtrA2介导的人涎腺腺样囊性癌细胞株线粒体凋亡的影响

目的探讨过表达微小RNA-455(miR-455)对线粒体促凋亡分子丝氨酸蛋白酶(Omi/HtrA2)介导的人涎腺腺样囊性癌细胞株线粒体凋亡的影响。方法收集70例因原发病手术切除并经病理诊断为人涎腺腺样囊性癌患者的癌组织为人涎腺腺样囊性癌组,选取正常涎腺组织65例为对照组,无菌操作下取得的新鲜组织放入无菌冻存管后迅速投入液氮中快速冷冻,再转至-80℃冰箱长期保存,采用qRT-PCR法检测两组组织miR-455表达情况。体外培养人涎腺腺样囊性癌患者ACC-M细胞,利用miR-455mimics转染ACC-M细胞为miR-455 mimics组,采用国际通用的与所有基因无同源性序列的miR-455-NC转染为阴性对照组,以未经处理的ACC-M细胞为空白对照组,48 h后收集各组细胞。利用qRT-PCR法检测miR-455表达情况;MTT法检测ACC-M细胞增殖能力;利用流式细胞仪检测细胞凋亡情况;免疫荧光检测细胞色素C释放情况;利用Western印迹检测免抗人增殖细胞核抗原(ki67)、Omi/HtrA2、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)3、caspase6蛋白表达情况。结果与对照组相比,人涎腺腺样囊性癌组miR-455表达显著降低(P<0.05);与空白对照组、阴性对照组比较,miR-455 mimics组ACC-M细胞中miR-455表达水平、细胞凋亡显著升高(P<0.05);miR-455 mimics组转染后48 h、72 h后OD值显著降低(P<0.05);与空白对照组、阴性对照组比较,miR-455 mimics组细胞色素C呈弥散性分布于细胞质中,围绕在细胞核周围且细胞色素C、线粒体平均光密度显著升高(P<0.05);miR-455 mimics组ACC-M细胞中ki67蛋白相对表达量显著降低(P<0.05),Omi/HtrA2、caspase3、caspase6蛋白相对表达量显著升高(P<0.05)。结论过表达miR-455可促进人涎腺腺样囊性癌ACC-M细胞凋亡,可能是通过激活Omi/HtrA2介导的线粒体凋亡途径而实现的。