鳖甲煎丸含药血清通过miR-21调控PI3K/Akt通路抑制人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的研究

目的探究鳖甲煎丸含药血清通过微小RNA 21(miR-21)调控磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路抑制人瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFB)增殖的影响。方法给予大鼠灌胃处理制备含药血清,将KFB细胞分为对照组、16.00%鳖甲煎丸含药血清组、miR NC组、miR-21 mimics组;实时荧光定量PCR检测正常皮肤成纤维细胞NFB及各组KFB细胞样本中miR-21表达水平;CCK-8检测KFB细胞增殖情况;流式细胞仪检测KFB细胞周期;Western blot检测细胞增殖、细胞周期及PI3K/Akt通路相关蛋白表达情况;裸鼠皮下移植人0.5 mm3瘢痕疙瘩组织构建瘢痕疙瘩裸鼠模型;建模成功后将裸鼠随机分为对照组、鳖甲煎丸组(12 g/kg鳖甲煎丸)、miR NC组(miR NC组)、miR-21 agomir组(miR-21 agomir),5只/组;鳖甲煎丸组裸鼠灌胃12 g/kg鳖甲煎丸,miR NC组与miR-21 agomir组裸鼠灌胃12 g/kg鳖甲煎丸后尾静脉注射50nmol/L miR NC及miR-21 agomir,对照组灌胃等量生理盐水,1次/天,连续30d;游标卡尺测量瘢痕疙瘩组织大小,并计算体积。结果与NFB相比相比,KFB细胞中miR-21表达水平显著增加(P<0.05)。相较于对照组,2.00%、4.00%、8.00%、16.00%鳖甲煎丸含药血清组KFB细胞增殖抑制率显著增加(P<0.05),具有浓度依赖性,选择16.00%鳖甲煎丸含药血清组进行后续实验(P<0.05)。相较于对照组,16.00%鳖甲煎丸含药血清组KFB细胞中miR-21、c-Myc表达水平、S期和G_(2)/M期细胞、CDK4、Cyclin D1、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt水平显著降低,细胞增殖抑制率、G_(0)/G_(1)期细胞显著增加(P<0.05);相较于16.00%鳖甲煎丸含药血清组,miR NC组miR-21、c-Myc表达水平、细胞增殖抑制率、G_(0)/G_(1)期细胞、S期和G_(2)/M期细胞、CDK4、Cyclin D1、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt水平无显著差异(P>0.05),miR-21 mimics组miR-21、c-Myc表达水平、S期细胞、CDK4、Cyclin D1、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt水平显著增加,细胞增殖抑制率、G_(0)/G_(1)期细胞显著降低(P<0.05);相较于对照组,鳖甲煎丸组瘢痕疙瘩体积显著减小(P<0.05);相较于鳖甲煎丸组,miR NC组瘢痕疙瘩体积无显著差异(P>0.05),miR-21 agomir组瘢痕疙瘩体积显著增大(P<0.05)。结论鳖甲煎丸含药血清通过下调miR-21表达来抑制PI3K/Akt通路活化,从而抑制KFB细胞增殖。