干扰素-γ通过调节分子伴侣干预人淋巴细胞抗原Ⅱ类表达的机制

目的探讨干扰素(IFN)-γ通过调节分子伴侣干预人淋巴细胞抗原(HLA)Ⅱ类表达的机制。方法培养获取的人黑色素瘤细胞系MelJuSo和IMRS人肺成纤维细胞作为原代细胞。对MelJuSo和IMRS细胞进行转染,生成稳定的MJ-BAT3-V5和MJ-CIITA-V5克隆体,使用Ii-启动子-CAT结构作为报告质粒,转染48 h后酶联免疫吸附试验(ELISA)检测CAT基因的表达;采用流式细胞术检测HLAⅡ类糖蛋白、HLA-DM和Ii;Western印迹检测BAT3耗尽后Ii的表达,IFN-γ刺激MelJuSo和IMRS细胞后通过Western印迹检测细胞提取物中BAT3的表达;对IFN-γ刺激和未受刺激的细胞免疫沉淀进行代谢标记,采用ELISA检测HLAⅡ、Ii和HLAⅠ表达水平,通过带有V5标记的BAT3(MJ-BAT3-V5)转染MelJuSo克隆细胞,实时聚合酶链反应(PCR)比较转染和未转染MelJuSo细胞中BAT3转录本水平,通过ELISA检测IFN-γ处理诱导的MelJuSo和IMRS细胞中CAT蛋白的表达。结果对BAT3、Ii和β-actin进行了Western印迹检测,BAT3残带,Ii明显消失;miRBAT3-GFP(miR4BAT3)与BAT3靶载体(miR10BAT3)两种miRBAT3载体导入MelJuSo细胞后,流式细胞术检测其中Ii、HLAⅡ和HLA-DM水平均明显降低(P<0.05);与MelJuSo细胞相比,MJ-BAT3-V5转染细胞的BAT3转录本水平增加了约7倍,在转染BAT3-V5的细胞中HLAⅡ和Ii类蛋白水平均明显升高,而HLA I蛋白水平明显降低(P<0.05);IFN-γ刺激48 h后BAT3蛋白水平明显升高(P<0.05);作为MelJuSo细胞对IFN-γ反应的对照,随着时间的增加检测出Ii的表达也增强,IFN-γ处理使MelJuSo细胞BAT3增加6~7倍,IFN-γ处理使IMRS细胞增加4~5倍,IFN-γ诱引内源性CⅡTA和BAT3在MelJuSo和BAT3-V5细胞中表达,刺激Ii启动子活性,与未受刺激的MelJuSo和BAT3-V5细胞相比,IFN-γ诱导的BAT3-V5细胞产生的CAT数量明显增加,CAT在IFN-γ刺激MJ细胞中的明显增加,与MelJuSo细胞相比,BAT3-V5细胞中CAT表达明显增加,在IFN-γ刺激MelJuSo细胞CAT的表达明显低于IFN-γ刺激BAT3-V5细胞(均P<0.05)。结论在IFN-γ作用下BAT3通过陪伴CⅡTA来调控HLAⅡ类表达,CⅡTA蛋白稳定性的调控为HLAⅡ类通路的调控提供了一种新的机制。