高邮鸭排卵前卵泡颗粒细胞体外分离培养及鉴定

Isolation,culture and identification of follicular granulosa cells from Gaoyou ducks before ovulation

卵泡发育是家禽繁殖性能的关键因素,其中,对卵泡发育有关键作用的细胞为卵巢颗粒细胞。本试验旨在探究高邮鸭卵巢颗粒细胞最优分离培养方法,建立高邮鸭颗粒细胞综合鉴定体系。选取产蛋期高邮鸭母鸭排卵前卵泡,探究不同消化温度、消化酶组、消化时长对颗粒细胞分离与培养的影响,筛选出最优消化方案;体外培养24 h观察不同处理组细胞生长状态及形态特征,并结合HE染色确定颗粒细胞形态,FSHR、LHR间接免疫荧光检测颗粒细胞特征蛋白表达,qRT-PCR检测特异性基因FSHR和LHR表达,以综合确定分离培养的鸭颗粒细胞特异性。结果发现,4℃、1 mg/mLⅡ型胶原酶+0.25%胰蛋白酶、9 min消化处理后获得的鸭卵巢颗粒细胞活率最佳,贴壁率最高,培养效果最优;选择贴壁效果良好的细胞进行HE染色,显微镜观察下细胞染色均匀,内有颗粒状物质,细胞呈现多角形,单个细胞具有多个伪足;FSHR、LHR间接免疫荧光检测表明,>90%细胞呈双阳性。同时,qPCR结果表明,在颗粒细胞内有FSHR、LHR基因表达。