温阳复元方通过调控线粒体铁死亡相关基因BCRP/FLVCR保护大鼠脑缺血再灌注损伤

目的 从线粒体铁死亡相关基因胸腺癌抵抗蛋白(BCRP)/人类猫白血病C亚类病毒受体(FLVCR)角度探讨温阳复元方对大鼠脑缺血再灌注(Cerebral ischemia-reperfusion, I/R)损伤的神经保护作用机制。方法 采用线栓法制备大鼠脑I/R模型,将84只SD雄性大鼠随机分为假手术组(SO)、模型组(MCAO)、补阳还五汤对照组(BYHW)及温阳复元方组(WYFY),每组21只,于再灌注后12h、3d和7d取材(n=7)。于缺血2h和取材前对大鼠进行神经功能缺损评分;采用透射电镜(TEM)观察再灌注3d时大鼠梗死灶周围的线粒体超微结构变化;通过荧光定量聚合酶链式反应(PCR)和蛋白印迹法(WB)观察各时间点BCRP/FLVCR mRNA及蛋白表达水平。结果 ①SO组无神经功能缺损,MCAO组神经功能评分显著升高(P<0.01);与MCAO组相比,BYHW组其评分仅在12h时显著减少(P<0.01),WYFY组其评分在各时间点均显著降低(P<0.01);而WYFY组于7d时其评分较BYHW组进一步下降(P<0.05)。②TEM结果显示:SO组大鼠线粒体结构完整,MCAO组线粒体形态异常,可见神经元线粒体体积变小,外膜破裂,线粒体嵴减少,BYHW和WYFY治疗后能明显减轻上述损害,而WYFY组其线粒体损害较BYHW组进一步减轻。③BCRP mRNA及蛋白表达变化:SO组可以检测到较高的BCRP mRNA和蛋白表达,MCAO组其mRNA及蛋白表达在各时间点均显著下降(P<0.01);与MCAO组同期对比,BYHW和WYFY治疗后均能提高其mRNA和蛋白表达(P<0.05或P<0.01);而WYFY组其mRNA和蛋白表达较BYHW组进一步升高(P<0.01)。④FLVCR mRNA及蛋白表达变化:SO组可以检测到较高的FLVCR mRNA和蛋白表达,MCAO组其mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.01);与MCAO组同期比较,BYHW组和WYFY组其mRNA和蛋白表达量显著增高(P<0.01);与BYHW组相比,WYFY组均能进一步增加其mRNA和蛋白表达(P<0.05或P<0.01),于7d时达最高峰(P<0.01)。结论 温阳复元方可能通过上调BCRP/FLVCR表达,减少细胞内铁过载,增加血红素铁的外流,调节铁代谢,抗氧化应激,进而抑制线粒体铁死亡,发挥神经保护作用,其疗效优于补阳还五汤。