PMA-qPCR方法快速检测细菌性果斑病菌活菌的研究

Quantitative PCR combined with PMA treatment for real-time and rapid determination of viable Acidovorax citrulli

本文将叠氮溴化丙锭(PMA)与qPCR技术相结合,建立了一种适于细菌性果斑病菌株活细胞快速检测的PMA-qPCR方法。通过试验控制单因素变化,对PMA预处理反应体系中的各参数进行优化,确立了PMA终浓度为9μg·mL^(-1),曝光时间为8 min的PMA预处理体系,能有效抑制1.0×10^(7)mL^(-1)灭活死菌的扩增,对活菌的扩增没有影响。当活菌数在2.0×10^(1)~2.0×10^(6)mL^(-1),qPCR反应体系中活菌数与Ct值呈线性相关(R^(2)=0.9827)。本文建立的PMA-qPCR方法可在一定范围内有效去除细菌性果斑病死菌的干扰,定量检测出活菌数量,研究结果可为植物细菌性果斑病的流行规律研究提供新的技术支撑,并能有效避免PCR检测实际样品可能造成的假阳性结果。