小鼠抗AHBA合酶多克隆抗体的制备与鉴定

Preparation and Identification of Polyclonal Antibodies against AHBA Synthase in Mice

为原核表达一株产安莎类抗生素链霉菌Streptomyces sp.CS中的AHBA合酶基因,并制备其多克隆抗体。构建了pRSET B-AHBA重组表达载体,通过大肠杆菌诱导表达。将表达的AHBA合酶融合蛋白经包涵体复性纯化后注射免疫小鼠,获得多克隆抗血清,并用Western blot方法检测抗体的特异性。通过实验成功构建重组质粒,诱导表达后得到AHBA合酶融合蛋白并纯化,ELISA实验检测显示制备的四种抗血清效价均在32000倍以上,最高达64000倍。原核表达获得了重组AHBA合酶融合蛋白,并成功制备了特异性良好的多克隆抗体,抗体可用于检测具有产安莎类抗生素潜能的微生物中AHBA合酶基因的表达情况,同时也为进一步探究AHBA合酶基因参与安莎类抗生素生物合成机制等后续工作打下基础。