鸡三种免疫抑制性病毒多重荧光PCR的建立

针对禽白血病病毒(Avian leukosis virus, ALV)-p27、禽网状内皮组织增殖病病毒(Reticuloendotheliosis Virus, REV)-LTR和鸡传染性贫血病毒(Chicken infectious anemia virus, CIAV)-VP3基因保守序列,分别设计引物和TaqMan-MGB探针。人工合成目的基因在内的序列,并与载体连接后构建重组质粒ALV-p27、 REVLTR和CIAV-VP3基因,测序正确后作为标准质粒。对反应条件进行优化后建立了多重荧光定量PCR方法,对方法的敏感性、特异性、重复性进行评价并利用该方法对临床样本进行检测。结果表明,该方法特异性良好,灵敏度高,重复性好。用建立的方法对142份临床样品进行检测,分别检出ALV、 REV和CIAV阳性样品39、 27、51份。同时用商品荧光PCR试剂盒做对比,二者符合率达到100%。研究建立的多重荧光定量PCR检测方法,特异性和敏感性强、稳定性高,可快速准确的鉴别ALV、 REV和CIAV。