miR-141-3p靶向调控Keap1对缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡、氧化应激和Nrf2/HO-1通路的影响

目的:探讨miR-141-3p通过靶向调控Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)对缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞氧化应激、凋亡和Nrf2/血红素氧合酶1(HO-1)通路的影响。方法:体外培养大鼠胚胎心肌细胞H9c2,构建心肌细胞H/R损伤模型。将H9c2细胞随机分为control组(正常培养的H9c2细胞)、H/R组(H9c2细胞经H/R处理)、H/R+miR-NC组(H9c2细胞NC转染经H/R处理)和H/R+miR-141-3p组(H9c2细胞转染miR-141-3p经H/R处理),每组设3个复孔。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法检测不同组别心肌细胞中miR-141-3p和Keap1表达水平,细胞毒性试验(CCK-8)法检测心肌细胞存活率,流式细胞术检测心肌细胞凋亡,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组心肌细胞中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)表达水平,化学荧光法检测各组心肌细胞活性氧(ROS)含量,蛋白免疫印迹法(Western Blotting)检测Nrf2、HO-1蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验和Western Blotting验证miR-141-3p和Keap1的靶向调控关系。结果:H/R处理可明显抑制心肌细胞miR-141-3p表达,促进Keap1 mRNA表达,提高ROS和MDA水平,降低SOD和GSH水平,抑制细胞存活,促进细胞凋亡。上调miR-141-3p表达可明显降低ROS和MDA水平,提高SOD和GSH水平,促进细胞存活,抑制细胞凋亡。miR-141-3p可靶向负性调控Keap1表达、上调Nrf2、HO-1蛋白表达对H/R处理心肌细胞发挥保护作用。结论:miR-141-3p靶向抑制Keap1可减轻H/R诱导的心肌细胞氧化应激损伤和细胞凋亡,进而发挥心肌保护作用。