袁氏扶脾清化方通过调节miR-199a/TLR4/NF-κB信号通路治疗腹泻型肠易激综合征的机制研究

目的:观察袁氏扶脾清化法对肝郁脾虚证腹泻型肠易激综合征(IBS-D)的治疗作用,并基于miR-199a/TLR4/NF-κB信号通路探讨其作用机制。方法:60只雄性SD大鼠,随机选取10只作为正常对照组,其余采用慢性束缚应激加番泻叶水煎剂灌胃法构造IBS-D“肝郁脾虚证”大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组、培菲康(175 mg/kg)阳性对照组及袁氏扶脾清化方低(17.5 g/kg)、中(35 g/kg)、高(70 g/kg)剂量组,每组10只。正常对照组和模型组予等体积生理盐水灌胃,连续2 w。观察治疗后各组大鼠的饮食情况、大便性状及体质量变化;HE染色观察各组大鼠结肠黏膜组织病理学;ELISA法检测血清及结肠组织炎性细胞因子IFN-γ、IL-1β水平;免疫组化法观察结肠黏膜中TRPV1表达;Western Blot检测各组大鼠结肠黏膜TLR4、NF-κBp65、Claudin-1、AQP3、TRPV1蛋白表达;实时荧光定量PCR检测结肠黏膜组织中miR-199a的表达。结果:模型组大鼠粪便稀溏、饮食及活动减少、毛发光泽变暗,性情躁动,体质量降低;治疗后粪便逐渐好转,饮食增加,毛发光泽转亮,体质量增加;HE染色显示各组大鼠结肠黏膜完整,未见黏膜糜烂及溃疡。与正常对照组比较,模型组血清及结肠黏膜IFN-γ、IL-1β水平显著升高,结肠黏膜TRPV1、TLR4、NF-κBp65蛋白表达显著升高,Claudin-1、AQP3蛋白及miR-199a表达显著降低。与模型组比较,袁氏扶脾清化方各剂量组大鼠血清及结肠组织IFN-γ、IL-1β水平及结肠黏膜TLR4、TRPV1、NF-κBp65蛋白表达显著降低,Claudin-1、AQP3蛋白及miR-199a表达显著升高。结论:袁氏扶脾清化方可通过调节IBS-D结肠黏膜的miR-199a/TLR4/NF-κB通路,降低血清及肠黏膜炎性因子IFN-γ、IL-1β水平,保护肠黏膜Claudin-1及AQP3,降低TRPV1的表达,从而具有治疗IBS-D的作用。