布鲁菌S2疫苗株GL_0002189基因原核表达及生物信息学分析

为区分羊种布鲁菌S2疫苗株为疫苗免疫还是自然感染,本课题组对布鲁菌S2疫苗株进行了测序,将测序得到的基因与已在NCBI数据库中提交的布鲁菌基因组进行比对,找出了布鲁菌S2(猪种)疫苗株特有的GL_0002189基因,再对GL_0002189基因进行克隆﹑表达及验证,并采用布鲁菌BP26基因当作阳性对照。同时对GL_0002189基因进行了生物信息学分析。结果发现,以绵羊S2疫苗免疫的血清当作抗体检测,重组蛋白BL21(pETBP26)、BL21(pETGL_0002189)与空菌BL21(DE3)比较,分别在32 kDa和29 kDa处出现条带。结果表明重组蛋白BL21(pETBP26)、BL21(pETGL_0002189)能够与布鲁菌S2免疫血清中的抗体特异性结合,且具有很好的免疫原性。另外,重组蛋白BP26与自然感染的血清发生特异性反应,而重组蛋白GL_0002189与自然感染的血清不发生特异性反应,因此GL_0002189基因在布鲁菌S2疫苗株中存在,而在羊种布鲁菌自然流行株中不存在。通过生物信息学分析发现,GL_0002189基因编码蛋白分子量约为24.1 kDa,含有1个660 bp的完整的开放阅读框,编码219个氨基酸,无跨膜区,有5个抗原表位。由此表明,本研究中的GL_0002189抗原可用于布鲁菌S2疫苗免疫与羊种布鲁菌自然感染的鉴别诊断,为布鲁菌病的诊断提供了理论支持。