菜豆黄花叶病毒RPA-LFD技术快速检测方法的建立与应用

Establishment and application of RPA-LFD technique for rapid detection of bean yellow mosaic virus

根据菜豆黄花叶病毒(bean yellow mosaic virus,简称BYMV)外壳蛋白基因序列的保守区设计特异性引物和探针,建立蚕豆中BYMV的重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,简称RPA)检测方法。同时,将该方法与侧向流动试纸条(LFD)检测方法相结合,建立RPA-LFD快速检测方法,并进行特异性和灵敏度验证。结果表明,该方法可在37~42℃等温条件下进行,30 min即可完成检测。灵敏度试验表明,采用RPA-LFD方法检测BYMV的灵敏性是PCR方法的100倍。在特异性试验方面,与同属于马铃薯Y病毒属亲缘关系较近的大豆花叶病毒(soybean mosaic virus,简称SMV)、菜豆普通花叶病毒(bean common mosaic virus,简称BCMV)和芜菁花叶病毒(turnip mosaic virus,简称TuMV)无交叉反应。因此,本研究建立的菜豆黄花叶病毒RPA-LFD技术检测快速、灵敏且高效,有望成为我国菜豆黄花叶病毒田间诊断与防控的实用性技术手段。