基于PPARγ/LXRα/ABCG1通路探讨黄连解毒汤对泡沫细胞脂质蓄积的干预作用

目的 基于过氧化物酶体增殖物激活受体γ/肝脏X受体α/ATP结合盒转运体G1 (PPARγ/LXRα/ABCG1)信号通路观察黄连解毒汤含药血清对巨噬细胞源性泡沫化脂质蓄积的影响,探讨清热解毒法干预动脉粥样硬化的部分作用机制。方法 采用80μg/mL的氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein, ox-LDL)诱导小鼠巨噬细胞RAW 264.7建立泡沫细胞模型。制备黄连解毒汤高(6.3g/kg)、低剂量组(3.15g/kg)含药血清以及正常对照组血清进行干预。收集细胞上清液,通过油红O染色观察巨噬细胞内脂滴形成及泡沫化程度;CCK-8法观察黄连解毒汤含药血清对泡沫细胞活力的影响;生化仪检测细胞内总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、游离胆固醇(FC)和胆固醇酯(CE)水平;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清脂蛋白脂酶(LPL)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;流式细胞仪测定细胞凋亡水平;蛋白免疫印迹法(Western Blot)测定细胞PPARγ、LXRα、ABCG1蛋白的表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)测定细胞内PPARγ、LXRα、ABCG1的mRNA水平。结果 黄连解毒汤含药血清高、低剂量组均可抑制巨噬细胞泡沫化。油红O染色显示,经ox-LDL诱导后,模型组细胞内可见大量红色脂滴,呈现出典型泡沫细胞形态,提示泡沫细胞模型制备成功;与ox-LDL模型组比较,黄连解毒汤含药血清高、低剂量组细胞上清IL-1β、TNF-α表达下调(P<0.05,P<0.01),LPL表达水平增多(P<0.05);巨噬细胞内胆固醇水平均降低(P<0.05);泡沫细胞凋亡率降低(P<0.01);PPARγ、LXRα、ABCG1蛋白及mRNA表达水平明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。与黄连解毒汤含药血清高、低剂量组比较,加入PPARγ抑制剂GW9662后,可减弱黄连解毒汤含药血清的干预作用(P<0.05,P<0.01)。结论 黄连解毒汤含药血清通过抑制ox-LDL诱导的巨噬细胞泡沫化减少泡沫细胞中的脂质蓄积;其机制可能与黄连解毒汤含药血清调节PPARγ/LXRα/ABCG1通路相关。