实时荧光定量TaqMan RT-PCR检测鸭新型呼肠孤病毒方法的建立及初步应用

研究旨在建立一种适用于鸭新型呼肠孤病毒检测的实时荧光定量TaqManRT-PCR技术。以鸭新型呼肠孤病毒(SDDZ株)RNA为模板,建立检测鸭新型呼肠孤病毒的实时荧光定量RT-PCR方法。制备含有上述NDRV目的片段的RNA作为标准品,以10倍比稀释的标准品建立标准曲线,测定敏感性。同时采用标准品检测该方法的批内和批间重复性,并与本实验室所保存的多种病毒进行特异性检测。结果:建立的实时荧光定量TaqManRT-PCR方法能在鸭新型呼肠孤病毒(SDDZ株)RNA样本中检出荧光信号。最低检出量为1.77copies/μL;线性范围达10个数量级。该方法重复性良好,批内变异系数不足1.1%;批间变异系数不足1.7%。该方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,经体外感染细胞培养物以及临床样品检测证实,该方法可实时反映病毒液中的病毒含量,可在获得样品后3h以内得到检测结果,可用于临床样品中鸭新型呼肠孤病毒的快速检测。