miR-27b-3p通过靶向Wnt3a调控Wnt/β-Catenin信号通路抑制肝星状细胞活化

目的探讨miR-27b-3p对肝星状细胞(HSC)活化的影响及其作用机制。方法取生长良好的LX-2细胞,利用10 ng/ml TGF-β1处理24 h以诱导其活化,并命名为LX-2-A细胞,免疫荧光法观察细胞中α-平滑肌肌动蛋白(SMA)的表达,qRT-聚合酶链反应(PCR)检测细胞中miR-27b-3p表达;利用LipofectamineTM2000转染试剂盒对LX-2-A细胞进行转染,并分为7组:空白组(正常培养的LX-2-A细胞)、mimics NC组(转染mimics NC)、miR-27b-3p mimics组(转染miR-27b-3p mim-ics)、si-NC组(转染si-NC)、si-Wnt3a组(si-Wnt3a)、miR-27b-3p mimics+pcDNA3.1组(共转染miR-27b-3p mimics和pcDNA3.1)、miR-27b-3p mimics+Wnt3a组(共转染miR-27b-3p mimics和pcDNA3.1-Wnt3a),qRT-PCR检测细胞中miR-27b-3p表达;细胞对数试剂盒(CCK)-8法检测各组细胞增殖;免疫荧光染色法观察各组细胞中α-SMA表达;Western印迹检测各组细胞中Wnt3a、Ⅰ型胶原蛋白(Collagen Ⅰ)、Collagen Ⅲ、基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP)-1及Wnt/β-catenin通路相关蛋白β-连环蛋白(catenin)、c-myc、细胞周期素(Cyclin)D1表达;荧光素酶报告基因实验检测miR-27b-3p与Wnt3a靶向关系。结果与LX-2细胞比较,LX-2-A细胞绿色荧光强度显著升高,表示α-SMA蛋白表达水平升高,提示TGF-β1诱导LX-2细胞活化成功;与LX-2细胞比较,LX-2-A细胞中miR-27b-3p表达水平显著降低(P<0.05);与空白组、mimics NC组比较,miR-27b-3p mimics组LX-2-A细胞中miR-27b-3p表达水平显著升高,吸光度OD值(24、48 h)、绿色荧光强度、Wnt3a、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、TIMP-1、β-catenin、c-myc、CyclinD1蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与空白组、si-NC组比较,si-Wnt3a组LX-2-A细胞中miR-27b-3p表达水平无显著变化(P>0.05),OD值(24、48 h)、绿色荧光强度、Wnt3a、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、TIMP-1、β-catenin、c-myc、CyclinD1蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与miR-27b-3p mimics组、miR-27b-3p mimics+pcDNA3.1组比较,miR-27b-3p mimics+Wnt3a组LX-2-A细胞中miR-27b-3p表达水平无显著变化(P>0.05),OD值(24、48 h)、绿色荧光强度、Wnt3a、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、TIMP-1、β-catenin、c-myc、CyclinD1蛋白表达水平显著升高(P<0.05);miR-27b-3p靶向调控Wnt3a的表达。结论过表达miR-27b-3p通过靶向下调Wnt3a表达,抑制Wnt/β-catenin通路激活,进而抑制LX-2-A细胞活化。