miR-145调控TGF-β通路在高血压大鼠心肌纤维化中的作用

目的探讨MicroRNA(miR)-145在自发性高血压大鼠(SHR)中的表达及其对心肌纤维化(MF)的影响机制。方法SHR大鼠分为模型组、rAAV9-mimic NC组、rAAV9-miR-145 mimic组、转化生长因子(TGF)-β1组和rAAV9-miR-145 mimic+TGF-β1组,每组12只;另设12只Wistar大鼠为对照组。rAAV9-mimic NC组、rAAV9-miR-145 mimic组和TGF-β1组分别尾静脉注射rAAV9-mimic NC、rAAV9-miR-145 mimic和TGF-β1(1.25μg/kg),rAAV9-miR-145 mimic+TGF-β1组经尾静脉给予rAAV9-miR-145 mimic和TGF-β1,对照组和模型组尾静脉注射生理盐水。于治疗前1 d和治疗第7、14、21天检测血压变化;给药结束后,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清心肌酶[肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)、心肌肌钙蛋白(cTn)I]和血浆血管紧张素(Ang)Ⅱ水平;解剖左心室并称重,计算左心室质量指数(LVMI);苏木素-伊红(HE)染色和Masson染色观察心室组织病理学变化,计算胶原容积分数(CVF);免疫组织化学染色检测心室组织Ⅰ型胶原蛋白(Collagen Ⅰ)和Ⅲ型胶原蛋白(Collagen Ⅲ)的表达;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测心肌组织miR-145、TGF-β1、Smad2、Smad3和Smad7 mRNA表达;Western印迹检测心肌组织TGF-β1/Smad通路相关蛋白[TGF-β1、Smad2、p-Smad2、Smad3、p-Smad3、Smad7]表达。结果治疗前,各组SHR收缩压均明显高于对照组(P<0.05);治疗后,与模型组相比,rAAV9-miR-145 mimic组在治疗第14、21天时收缩压显著下降(P<0.05)。与对照组相比,模型组血清CK-MB、cTnI和血浆Ang Ⅱ水平、LVMI、CVF、CollagenⅠ和Collagen Ⅲ及TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA表达、TGF-β1蛋白表达、p-Smad2/Smad2和p-Smad3/Smad3比值显著升高,miR-145、Smad7 mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05),心肌细胞出现明显的病理损伤,可见炎性细胞浸润和大量蓝色胶原纤维沉积;与模型组相比,rAAV9-miR-145 mimic组血清CK-MB、cTnI和血浆Ang Ⅱ水平、LVMI、CVF、Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ及TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA、TGF-β1蛋白表达、p-Smad2/Smad2和p-Smad3/Smad3比值显著下降,miR-145、Smad7 mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05),心肌细胞病理损伤和炎性细胞浸润情况明显改善,蓝色胶原纤维沉积减少;并且在miR-145 mimic干预的基础上,上调TGF-β1的表达,可显著逆转miR-145过表达对TGF-β1/Smad通路和高血压大鼠MF的抑制作用。结论上调miR-145表达可减轻高血压大鼠MF,其机制可能与负调控TGF-β1/Smad通路有关。