二草清肝汤含药血清对人源HL-7702肝细胞凋亡的影响及其机制研究

Effect and Mechanism of Ercao Qinggan Decoction Containing Serum on Apoptosis of Human HL-7702 Hepatocytes

目的:探究二草清肝汤(EQD)含药血清对脂多糖(LPS)诱导的人源HL-7702肝细胞凋亡的抑制作用及其机制。方法:制备急性肝衰竭小鼠模型,分组后分别对各组小鼠以相应剂量EQD和生理盐水进行灌胃,末次注射LPS 24h后,提取含药血清备用;采用LPS诱导人源HL-7702肝细胞建立细胞凋亡模型,随机分为空白对照组、LPS组、LPS+EQD低剂量组、LPS+EQD中剂量组、LPS+EQD高剂量组,分别采用相应剂量的含药血清100μL预处理2h后,然后再加入10μg/mL的10μL LPS处理24h,空白对照组予相同剂量的生理盐水。采用流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫荧光法观察GSK3β核易位情况,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测兔抗人单克隆抗体(Bax)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)mRNA的表达,Western-blot法检测HL-7702细胞内AKT、p-AKTS、GSK3β、p-GSK3β的表达。结果:与空白对照组比较,LPS处理后,HL-7702凋亡率显著上升(P<0.05);经低、中、高EQD处理后,结果显著下降(P<0.05)。免疫荧光检测显示,GSK3β主要在HL-7702细胞质表达;与空白对照组比较,LPS处理后,HL-7702中GSK3β表达显著上升,且趋向于向细胞核中聚集(P<0.05);经低、中、高EQD分别处理后,表达显著下降且趋向于向细胞质中聚集(P<0.05)。qPCR检测显示,与对照组比较,LPS处理后,HL-7702细胞中Bax、TNF-α、IL-6显著上升,Bcl-2表达显著下降(P<0.05);经低、中、高EQD处理后,前者显著下降,后者显著上升(P<0.05)。Western-blot检测显示,与对照组相比,LPS处理后,AKT、GSK3β、p-AKT、p-GSK3β表达显著上升(P<0.05);经低、中、高EQD处理后,AKT、GSK3β表达显著上升(P<0.05),其余表达显著下降(P<0.05)。结论:EQD预处理可以显著降低LPS诱导的人源HL-7702肝细胞凋亡率,其机制可能与抑制TLR4/PI3K/AKT/GSK3β信号通路有关。