姜黄素通过NLRP3炎性体信号通路在肺泡巨噬细胞焦亡模型中的作用机制

目的:研究姜黄素通过NLRP3炎性体信号通路在LPS/尼日利亚菌素诱导肺泡巨噬细胞焦亡的作用机制。方法:大鼠巨噬细胞系NR8383,正常复苏后,用含10%胎牛血清、80%F12K培养基在37℃、5%CO_(2)的条件下培养,每2~3天传代1次。将对数生长期细胞NR8383离心处理,800 r/min,10 min,离心后对细胞进行计数,之后接种于96孔板中,每孔接种2×10^(4)个细胞,每孔加100μl的细胞培养液。接种12 h后随机分为空白对照组、姜黄素组、LPS组、LPS+姜黄素组、LPS+尼日利亚菌素处理组、LPS+尼日利亚菌素+姜黄素处理组,按照程序对细胞进行加样处理,然后置培养板于37℃,5%CO_(2)孵箱中培养,3个重复/组。各组分别加入相应的药物或试剂后,置培养板于37℃,5%CO_(2)孵箱中培养。2 h后加入CCK-8进行反应,3 h后检测各组细胞的OD值。加样反应2 h后,Western印迹检测细胞中NLRP3、GSDMD等焦亡相关蛋白表达情况。结果:细胞培养在有血清的情况下,与空白组相比,姜黄素提高细胞活力,促进细胞增殖。细胞培养在无血清的情况下,与LPS组相比,LPS+姜黄素组降低细胞活力,抑制细胞增殖;同时在无血清的情况下,与LPS+尼日利亚菌素组比较,LPS+姜黄素+尼日利亚菌素组提高细胞活力,促进细胞增殖。Western印迹法检测结果显示,与空白对照组比较,姜黄素组细胞的Caspase-1升高有点大,NLRP3略微升高,GSDMD略下降,由于三个凋亡蛋白趋势不一致,未能能说明姜黄素对于正常细胞会产生什么影响。与LPS组比较,姜黄素+LPS组细胞的NLRP3、Caspase-1、GSDMD三个凋亡蛋白均上升,结果提示细胞凋亡更加严重了。与LPS+尼日利亚菌素组比较,LPS+尼日利亚菌素+姜黄素组细胞的NLRP3、Caspase-1、GSDMD三个凋亡蛋白均一致下降,而且下降幅度较大,结果提示在这个模型的条件下,姜黄素有抑制细胞凋亡的作用。结论:综合细胞增殖率和Western印迹检测结果,姜黄素可能具有促进LPS诱导的细胞凋亡的作用,但对LPS和尼日利亚菌素诱导的细胞凋亡显示出一定的抑制作用。