异丙酚预处理内皮细胞来源的外泌体对氧化应激诱导心肌细胞坏死凋亡的影响

目的探讨异丙酚预处理内皮细胞来源的外泌体(p-exo)对氧化应激诱导H9C2心肌细胞坏死凋亡的影响。方法采用超高速离心法制备不同浓度异丙酚与人脐静脉内皮细胞(HUVECS)共孵育上清外泌体标准品,并通过透射电镜(TEM)、纳米颗粒示踪分析(NTA)及表面标志物CD63、CD9等蛋白免疫印迹(WB)对外泌体进行结构分析鉴定。通过过氧化氢(H2O2),处理H9C2心肌细胞建立缺血再灌注氧化应激损伤模型,再用PKH67标记外泌体,采用激光共聚焦显微镜观察心肌细胞摄取内化外泌体的过程,按照是否加入外泌体随机分为5组:对照组(NC)、H2O2处理组、H2O2处理后加入无异丙酚处理内皮细胞来源的外泌体(H2O2^(+)nc-exo)、H2O2处理后加入异丙酚处理内皮细胞来源的外泌体组(H2O2^(+)p-exo)及H2O2处理后加入异丙酚溶剂DMSO处理的内皮细胞来源的外泌体组(H2O2^(+)d-exo)。外泌体处理后的细胞活性通过CCK-8试剂盒进行测定,同时采用透射电子显微镜观察细胞的损伤程度,细胞坏死性凋亡和相关蛋白的变化则通过Annexin V-FITC/碘化丙啶(PI)染色和Western Blot进行分析测定。结果NTA示异丙酚处理p-exo浓度约102.54×10 particles/mL,其形貌为双层膜囊泡,直径约为97nm。与NC组相比,通过H2O2(500μmol/L)处理2h后建立的H9C2心肌细胞缺血再灌注氧化应激损伤模型中的心肌细胞活性显著降低(P<0.001)。而当引入15μg/100μL浓度p-exo后心肌细胞活性较前明显恢复(P<0.001),同时心肌细胞坏死性凋亡减少(P<0.01),受体相互作用蛋白(RIP)1(P<0.05)、RIP3(P<0.01)及混合谱系激酶结构域蛋白(mLKL)表达(P<0.01)降低,胞膜上p-mLKL蛋白表达降低(P<0.05)。结论异丙酚处理HUVECS来源p-exo可以通过下调心肌细胞中坏死性凋亡蛋白RIP1、RIP3、mLKL及胞膜上p-mLKL蛋白表达来有效地减少氧化应激诱导的H9C2心肌细胞坏死凋亡。