产肠毒素大肠杆菌和沙门氏菌的多重PCR检测方法构建

为了建立一种可同时检测禽产肠毒素大肠杆菌(ETEC)和沙门氏菌(Salmonella)的多重PCR方法,针对产肠毒素大肠杆菌致病基因Hly E、沙门氏菌特异基因inv A的基因保守区域合成两对特异性引物(目的片段为550 bp和825 bp),通过优化反应条件建立多重PCR检测方法,并反复验证分析其特异性、灵敏性和重复性,同时应用该方法对临床样本进行初步应用。结果显示:该方法可从同一样品中同时特异性扩增产肠毒素大肠杆菌Hly E基因、沙门氏菌inv A基因目的条带,对其他菌株均不能扩增出目的条带;检测沙门氏菌和产肠毒素大肠杆菌的灵敏度分别为0.078 ng/μL和0.78 ng/μL,且重复性良好。用建立的多重PCR方法对采集的59份粪便样品进行检测,分别检出产肠毒素大肠杆菌和沙门氏菌的样本为13份和7份,同时携带产肠毒素大肠杆菌和沙门氏菌的样本检出7份。该方法特异性、灵敏性、重复性良好,为鉴别诊断这两种细菌所致鸡腹泻病提供了一种快速准确的检测途径。