甘氨酸对小鼠完整卵巢组织玻璃化冷冻的影响

本实验旨在探究与传统冷冻液相比,昆明小鼠完整卵巢组织玻璃化冷冻液中添加甘氨酸对组织内卵母细胞解冻后细胞形态、组织内凋亡基因表达的影响。选用15只7~8周龄雌性昆明小鼠,取卵巢分为3组,即冷冻液组、血清+冷冻液组、甘氨酸+冷冻液组(在冷冻液、解冻液中添加甘氨酸使其终浓度为1 mmol/L),每组10个卵巢。对解冻后卵巢组织分别体外恢复3 h以及体外培养4 d,采用western blot法检测各组凋亡蛋白(cleaved-caspase 3、Bcl-2、Bax)表达情况以及荧光定量PCR检测凋亡相关mRNA(GAPDH、Bcl-2、Bax)的表达情况。结果表明:甘氨酸+冷冻液组解冻体外恢复3 h后卵母细胞形态正常率高于冷冻液组(P<0.05),也高于血清+冷冻液组但差异不显著;甘氨酸+冷冻液组的cleaved-caspase 3表达情况低于其他2组(P<0.05),Bcl-2/Bax凋亡蛋白表达水平高于其他2组(P<0.05);甘氨酸+冷冻液组GAPDH基因相对表达量高于其他2组(P<0.05)。甘氨酸+冷冻液组Bcl-2/Bax基因比值高于血清+冷冻液组、冷冻液组(P<0.05)。结果表明,添加1 mmol/L甘氨酸可以保护解冻后卵母细胞的形态结构以及抑制卵巢组织内细胞凋亡水平。