雷帕霉素对慢性肾衰竭大鼠主动脉平滑肌细胞钙化及自噬的影响

Effects of rapamycin on calcification and autophagy of aortic smooth muscle cells in rats with chronic renal failure

目的探讨雷帕霉素抑制剂对慢性肾衰竭平滑肌细胞(VSMC)钙化的影响机制。方法取33只雄性昆明大鼠自由饮用2%葡聚糖硫酸钠(DSS)水溶液共7 d,普通饮水14 d。随机选取3只大鼠取肾脏组织进行病理学检查,其余30只随机分为模型组、CRF+I组和CRF+I+3-甲基腺嘌呤(MA)组,每组10只。观察各组相关生化指标变化;苏木素-伊红(HE)染色检测大鼠肾脏组织形态;茜素红染色及细胞钙沉积量检测钙化结节情况;免疫印迹检测大鼠主动脉上α-平滑肌肌动蛋白(SMA)和runt相关转录因子(Runx)2蛋白表达(血管平滑肌标志物和成骨指标)、自噬相关蛋白(Beclin)1和微管相关蛋白轻链(LC)3Ⅱ/LC3Ⅰ及雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路蛋白;免疫组化检测大鼠主动脉上α-SMA和Runx2蛋白表达(血管平滑肌标志物和成骨指标);透射电镜观察VSMC内自噬体水平。结果与模型组比较,CRF+I组p-mTOR蛋白表达明显降低,自噬体增加,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclinl、α-SMA蛋白表达明显升高,成骨指标Runx2蛋白表达明显降低(均P<0.05);利用3-Ma抑制自噬后,自噬体减少,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclinl、α-SMA蛋白表达明显降低,成骨指标Runx2蛋白水平明显升高(均P<0.05)。结论雷帕霉素抑制剂对大鼠CRF具有一定疗效,其机制可能与雷帕霉素抑制剂对激活腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/mTOR通路的调控,从而促进自噬,减弱VSMC钙化有关。