固本健脑方对AD大鼠肠道菌群和C/EBPβ/AEP信号通路的影响

目的探讨固本健脑方对阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)大鼠肠道菌群及C/EBPβ/AEP信号通路的作用。方法50只SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、固本健脑方高、低剂量组(以下简称固高、固低组)、益生菌组共5组,每组10只。正常组不处理,其余各组双侧大脑海马区注射Aβ25-35建立AD模型。固高组、固低组给予固本健脑方灌胃,益生菌组给予双歧杆菌三联活菌片灌胃,连续灌胃8周后用水迷宫试验检测大鼠的空间记忆能力;用HE染色检测各组大鼠神经元数量形态;用尼氏染色检测尼氏小体分布及数量;通过Western blot法检测大鼠海马C/EBPβ/AEP信号通路蛋白的表达,包括C/EBPβ、p-C/EBPβ、AEP;16SrRNA检测大鼠粪便菌群门水平和属水平的丰度和多样性。结果①水迷宫实验表明,在定向航行测试中,正常组的大鼠逃避潜伏期时间明显短于模型组,模型组的大鼠逃避潜伏期时间明显长于固高组、固低组和益生菌组,且运动轨迹杂乱无章。在空间探索实验中,与正常组相比,模型组大鼠穿越目标象限平台的次数明显减少;而与模型组相比,各给药组大鼠穿越平台的次数显著增加。②HE染色表明,正常组海马神经元数量最多,形态完整,而模型组数量明显减少,排列稀疏散乱,各治疗组较模型组而言,神经元细胞数量增多,且细胞排列相对整齐均匀。③尼氏染色实验表明,正常组的细胞胞核圆满,排列整齐,神经元尼氏体数量丰富。而模型组的胞核破裂不完整,排列分散,细胞内尼氏体数量稀少。与模型组相比,益生菌组和固高组、固低组神经元细胞数目受损较少,胞核形态明显改善,尼氏体排列相对有序均匀紧密。④Western blot显示,正常组的三个蛋白表达量均低于模型组,和模型组相比,固高组、固低组、益生菌组的C/EBPβ、p-C/EBPβ、AEP三个蛋白的表达量均下降。⑤16SrRNA实验表明,在门(phy⁃lum)水平上,模型组的脱硫杆菌门(Desulfobacterota)丰度高于空白组和药物组,在属(genus)水平上,与药物组相比,模型组的苏黎世杆菌属(Turicibacte-r)和布劳特氏菌属(Blautia)丰度相对降低,而和药物组比,模型组毛螺菌科NK4A136属(Lachn-ospiraceae NK4A136 group)、葡聚糖菌属(Colidextribacter)和脱硫弧菌属(Desulfovibrionaceae)的丰度相对增加。结论固本健脑方可改善由Aβ25-35诱导的AD大鼠学习记忆能力,其机制可能与其调节肠道菌群,发挥“肠-脑轴”机制,从而抑制C/EBPβ/AEP信号通路的表达有关。