吴茱萸经不同比例甘草炮制后肝毒性变化与对CYP450酶调控的相关性分析

目的通过分析吴茱萸经不同比例甘草炮制后致小鼠肝毒性的差异与肝脏细胞色素P450(CYP450)酶蛋白和mR⁃NA表达变化间的联系,探寻甘草炮制减轻吴茱萸肝毒性的作用靶点,阐释吴茱萸甘草炮制的原理及科学内涵。方法参照《中国药典》2020版中制吴茱萸的炮制方法制备吴茱萸不同比例甘草炮制品;80只雄性小鼠随机分8组,分别为空白组、对乙酰氨基酚组、吴茱萸生品组、无甘草炮制品组和甘草炮制品(100∶3、100∶6、100∶12、100∶24)组,吴茱萸的给药剂量为30 g·kg-1;采用酶联免疫法检测血清中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、乳酸脱氢酶(LDH)、碱性磷酸酶(AKP)和白蛋白(ALB)水平;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝组织Cyp1a2、Cyp2c29、Cyp2d22、Cyp2e1、Cyp3a11蛋白表达;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肝组织Cyp1a2、Cyp2c29、Cyp2d22、Cyp2e1、Cyp3a11 mRNA表达;采用两变量回归分析法对AST和ALT水平与CYP450酶蛋白及mRNA表达进行相关性分析。结果与空白组相比,生品组和各炮制品组小鼠体质量增加减缓,血清中AST、ALT、LDH、AKP和ALB水平显著升高(P<0.01),Cyp1a2 mRNA表达显著增加(P<0.01),Cyp2c29和Cyp2e1的蛋白及mRNA表达明显减少(P<0.05或P<0.01),Cyp2d22 mRNA表达显著减少(P<0.01),Cyp3a11的蛋白表达明显增加(P<0.05或P<0.01),肝体指数仅生品组和无甘草炮制品组明显增加(P<0.05或P<0.01);与生品组相比,各炮制品组小鼠体质量增加较快,血清AST、ALT、LDH、AKP和ALB水平均显著降低(P<0.01),Cyp2c29蛋白表达明显减少(P<0.05或P<0.01),Cyp1a2 mRNA表达显著减少(P<0.01),无甘草炮制品组和甘草炮制品(100∶3、100∶6、100∶24)组Cyp2c29 mRNA及甘草炮制品(100∶6、100∶12、100∶24)组Cyp2d22和Cyp2e1 mRNA表达亦显著减少(P<0.01);Cyp3a11 mRNA表达与AST水平及Cyp1a2 mRNA表达与ALT水平存在正相关性。结论吴茱萸生品及炮制品肝毒性的差异与对肝脏CYP450酶多个亚型的调控有关,其中回调Cyp1a2和Cyp3a11 mRNA表达与吴茱萸甘草炮制减轻肝毒性成正相关。