miR-576-5p通过结合CADM2调节胃腺癌DNA损伤和放化疗敏感性

目的 探究miR-576-5p通过调控细胞黏附分子(CADM)2基因对胃腺癌DNA损伤和放化疗敏感性的影响。方法 GEO2R分析胃腺癌数据集(GSE26595、GSE6174)中表达上调的基因,GSEA分析miR-576-5p与细胞增殖和DNA损伤的关系。按照转染物的不同,分为空白对照组(miR-NC)和miR-576-5p模拟物组(miR-576-5p),向miR-576-5p组的BGC-823、SGC-7901细胞中转染miR-576-5p模拟物组,miR-NC组细胞仅转染对应的对照片段。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测BGC-823、SGC-7901细胞中miR-576-5p的表达水平,细胞计数试剂盒(CCK8)检测细胞活力。将miR-576-5p过表达的BGC-823细胞皮下注射至裸鼠体内,成瘤后检测小鼠瘤重和体积,qRT-PCR检测肿瘤组织中miR-576-5p表达水平。以不同剂量的γ射线照射BGC-823、SGC-7901细胞,Western印迹检测γH2AX的蛋白表达。CCK8检测细胞对多柔比星化疗的敏感性。双荧光素酶活性实验验证miR-576-5p和CADM2的关系,qRT-PCR和Western印迹检测转染miR-576-5p模拟物的BGC-823、SGC-7901细胞中CADM2表达。向miR-576-5p高表达的BGC-823、SGC-7901细胞中转染CADM2过表达质粒,设为miR-576-5p+CADM2组,Western印迹检测CADM2的表达,CCK8检测细胞活力。结果 与miR-NC组相比,miR-576-5p组细胞活力显著增强(P<0.05)。体内实验结果表明,miR-576-5p过表达显著诱导了胃腺癌BGC-823细胞的肿瘤体内增殖,肿瘤体积和质量显著增加(P<0.05),miR-576-5p在miR-576-5p过表达的肿瘤组织中显著上调(P<0.05)。与miR-NC组相比,miR-576-5p组γH2AX蛋白表达显著下调,且呈照射剂量依赖性。同时剂量依赖性抑制胃腺癌细胞对多柔比星的化疗敏感性,抑制细胞活力(P<0.05)。与miR-NC组相比,miR-576-5p组荧光素酶活性被显著抑制(P<0.05),miR-576-5p过表达显著抑制了CADM2 mRNA和蛋白表达(P<0.05)。与miR-NC组相比,miR-576-5p组CADM2的表达显著下调,而与miR-576-5p组相比,miR-576-5p+CADM2组CADM2表达上调。与miR-NC组相比,miR-576-5p组细胞活性显著增强,而与miR-576-5p组相比,miR-576-5p+CADM2组细胞活性显著被抑制(P<0.05)。结论 miR-576-5p在胃腺癌中高表达,通过靶向抑制CADM2的表达促进胃腺癌细胞体内外增殖,抑制DNA损伤和降低对放化疗的敏感性。