基于Wnt/β-catenin信号通路探讨八珍荔核抗纤方对HSC活化增殖、迁移的影响

目的 观察八珍荔核抗纤方对HSC-T6活化增殖、迁移的影响,并探讨其作用机制。方法 将雄性SD大鼠随机分为空白对照组和八珍荔核抗纤方低、中、高剂量组,空白对照组用生理盐水灌胃,含药血清低、中、高组以纯水溶解八珍荔核抗纤方颗粒进行灌胃。换算成SD大鼠的低、中、高剂量分别为7.96g·kg^(-1)、15.93g·kg^(-1)、31.86g·kg^(-1);连续灌胃7d,最后取血制备空白血清和含药血清。通过噻唑蓝(MTT)法测定TGF-β1诱导HSC-T6细胞活化的最佳浓度及不同浓度,八珍荔核抗纤方含药血清对TGF-β1诱导HSC-T6细胞活化增殖影响。细胞划痕愈合法测定八珍荔核抗纤方含药血清对HSC-T6细胞迁移的影响;免疫荧光法测定HSC活化相关指标Col I、α-SMA及Wnt/β-catenin信号通路核心因子β-catenin表达的影响,蛋白质印迹法(western blot)测定八珍荔核抗纤方对HSC活化相关蛋白Col I、α-SMA及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt1、β-catenin、p-GSK3β、Cyclin D1表达的影响;qPCR测定八珍荔核抗纤方对Wnt/β-catenin信号通路相关因子Wnt1、β-catenin、Cyclin D1表达的影响。结果 MTT实验结果显示,rhTGF-β1刺激HSC-T6活化的最佳浓度为10ng/ml;与模型组比较,八珍荔核抗纤方低、中、高含药血清均能抑制rhTGF-β1刺激的HSC-T6细胞增殖活化(P<0.05),其抑制强度具有剂量依赖性(P<0.05)。划痕实验结果显示,与模型组相比,八珍荔核抗纤方含药血清低、中、高剂量组的细胞迁移能力减弱(P<0.05),且具有剂量依赖性(P<0.05)。Western Blotting实验结果显示,与模型组比较,八珍荔核抗纤方含药血清低、中、高剂量组Col I、α-SMA及β-catenin蛋白表达水平均降低(P<0.05);八珍荔核抗纤方含药血清中、高剂量组Wnt1、p-GSK3β、Cyclin D1蛋白表达水平降低(P<0.05);八珍荔核抗纤方含药血清低剂量组Wnt1、p-GSK3β、Cyclin D1蛋白表达水平无明显变化(P>0.05)。免疫荧光实验结果显示,与模型组比较,八珍荔核抗纤方含药血清低、中、高剂量组Col I、α-SMA及细胞核内β-catenin平均荧光强度均降低(P<0.05)。qPCR实验结果显示,与模型组比较,八珍荔核抗纤方含药血清低、中、高剂量组β-catenin基因表达水平均降低(P<0.05);八珍荔核抗纤方含药血清中、高剂量组Wnt1、Cyclin D1基因表达水平降低(P<0.05);八珍荔核抗纤方含药血清低剂量组Wnt1、Cyclin D1基因表达水平无明显变化(P>0.05)。结论 八珍荔核抗纤方可以抑制HSC的活化增殖、迁移,减少ECM合成进而抗肝纤维化,可能与调控Wnt/β-catenin信号通路有关。